张洪渊第四章第六节蛋白质分离纯化.pptVIP

第六节 蛋白质的分离纯化与测定 二、蛋白质的分离纯化方法 ◇（一）根据分子大小不同的纯化方法 ◇（二）利用溶解度差别的纯化方法 ◇（三）根据电荷不同的纯化方法 ◇（四）利用选择性吸附的纯化方法 ◇（五）利用配体的特异性亲和力的纯化方法 （一）根据分子大小不同的纯化方法 ◇ 1.透析和超滤 ◇ 2.密度梯度离心 ◇ 3.凝胶过滤 1.透析和超滤 超过滤（ultrafiltration） 2.密度梯度离心法（density gradient） 3.凝胶过滤 原理： 凝胶层析也称为排阻凝胶层析、凝胶过滤和分子筛层析。它是60 年代发展起来的，利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的一种方法。由于被分离物质的分子大小（直径）和形状不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱，而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进出胶粒网孔，使之洗脱时流程增长，移动速度慢而后流出层析柱。 应用 测定分子量 分子筛层析原理示意图 分子筛层析与洗脱曲线 洗脱体积与相对分子质量的关系 （二）利用溶解度差别的纯化方法 ◇ 1.等电沉淀和PH控制 ◇ 2.蛋白质的盐溶和盐析 ◇ 3.有机溶剂分级分离 ◇ 4.温度对蛋白质溶解度的影响 1.等电沉淀和PH控制 蛋白质处于