聚-ADP-核糖基化在六价铬诱导人支气管上皮细胞基因组DNA 甲基化水平改变中的作用.pdfVIP

·基础研究 · 占5面 稿号:ZHYF-2013-0604-0684 编辑：郑湃 聚-ADP-核糖基化在六价铬诱导人支气管上皮细胞基因组DNA 甲基化水平改变中 的作用 黄海燕 蔡剑锋 胡恭华 夏菠 杨淋清 刘建军 黄新凤 吴德生 庄志雄 DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2014.03. 基金项目：国家自然科学基金81370080）；深圳市重点实验室项目 （CXB201104220031A）；深圳市科技研发资金项目（JCYJ20130329103949642） 作者单位：518055 深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室 通信作者：庄志雄，Email：zxzhuang2007@126.com [摘要] 目的研究聚-ADP 核糖基化与DNA 甲基化在六价铬[Cr（Ⅵ）]致癌过程中的作 用，并对两者之间的联系进行探讨。方法 选用前期建立的聚-ADP 核糖水解酶（PARG）缺 陷的人支气管上皮细胞（16HBE细胞）作为研究对象，使用Cr （Ⅵ）分别对正常 16HBE 细胞和PARG缺陷细胞进行处理，通过甲基化免疫荧光技术分析两种不同细胞基因组DNA 整体甲基化水平变化，同时检测整体甲基转移酶活性的变化，并进一步利用RT-PCR 和 westernblotting 分别从mRNA 和蛋白水平上分析DNA 甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a、 DNMT3b、MBD2）的表达变化。结果 正常16HBE细胞Cr （Ⅵ）处理24h后，基因组DNA 甲基化水平降低，且具有剂量效应关系，而PARG缺陷细胞此种表现不明显；当Cr （Ⅵ） 的作用剂量为5.0µmol/L 时，16HBE细胞和PARG缺陷细胞内总体DNA 甲基转移酶活性分 别为49.33±2.65、80.05±2.05，较对照组（分别为99.27±1.10、99.30±0.60）下降了50%和20%。 正常16HBE 细胞Cr （Ⅵ）处理24h后，DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD2 的mRNA 和蛋白水平表达均呈下降趋势。PARG缺陷细胞中DNMT1和DNMT3a 的表达出现下调，0、 0.3、1.2、5.0μmol/LCr （Ⅵ）处理组胞内DNMT1mRNA 的相对表达量分别为0.99±0.04、 0.79±0.05、0.65±0.08、0.51±0.10 （F=544.13，P0.01），蛋白相对表达量分别为1.00±0.03、 0.69±0.15、0.65±0.10、0.55±0.13 （F=214.12，P0.01）；DNMT3amRNA 的相对表达量分 别为1.00±0.04、0.93±0.11、0.79±0.07、0.59±0.05 （F=498.16，P0.01），蛋白相对表达量 分别为1.00±0.14、0.97±0.11、0.79±0.17、0.57±0.15 （F=390.11，P0.01）；但DNMT3b和 MBD2表达改变不明显。结论 聚-ADP 核糖基化可通过调节DNMT3b和MBD2 的活性，对 抗Cr （Ⅵ）诱导的广泛基因组低甲基化，维持细胞基因组整体甲基化水平的稳定。 [关键词] 铬；DNA 甲基化；人支气管上皮细胞;聚-ADP 核糖基化 Effect of Poly-ADP-ribosylation on the alteration of DNA methylation level of human bronchialepithelialcellsinducedbyCr(VI HuangHaiyan ，CaiJianfeng，HuGonghua，Xia* Bo，YangLinqing，LiuJianjun，HuangXinfeng，WuDesheng，ZhuangZhixiong. KeyLaboratory* of Modern Toxicology of Shenzhen, Shenzhen Cente fo Disease Control and Prevention, Guangdong518055,China Co espondingauthor:ZhuangZhixiong,Email:zxzhuang2007@126.com [Abstract] Objective Torevealtheroleofpoly-ADP-ribosylationandDNAmethylation in carcinogenic process induce