抗肾纤维化药物高内涵筛选模型的建立及应用-中国药理学通报.pdfVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１７Ｍａｒ；３３（３）：３２７～３４ ·３２７· 网络出版时间：２０１７－３－４１１：５０　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ１１５０．０１６．ｈｔｍｌ 抗肾纤维化药物高内涵筛选模型的建立及应用 １ １ １ １ ３ ２ ３ １ １ 孙雪娇 ，刘　 ，李　城 ，王曦廷 ，吴清华 ，张宇欣 ，栗世铀 ，李亚东 ，李　 （北京中医药大学１．基础医学院，２．中药学院，北京　１０００２９；３．中国科学院北京基因组研究所，北京　１００１０１） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１７．０３．００８ 因此，进行有关抗肾纤维化药物的研发，对于临床肾 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１７）０３－０３２７－０８ 纤维化的预防及治疗具有重大意义。 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ２８２．７１；Ｒ３６３３３２；Ｒ６９２９；Ｒ９６５１ 　　研究证明很多中药化合物显示出了抗肾纤维化 摘要：目的　建立可用于高内涵分析的肾纤维化体外的细胞 ［４－５］ 的作用 。但是中药或天然药物成分复杂、种类 模型，为抗肾纤维化中药化合物的筛选和机制研究奠定基 繁多，需要建立高效快速的的筛选模型，同时基于动 础。方法　本研究通过ＴＧＦ１诱导正常大鼠肾成纤维细 β 物保护的原则，为了减少大量动物实验，也需要建立 胞ＮＲＫ４９Ｆ，以肌成纤维细胞标志 平滑肌肌动蛋白（ α α ＳＭＡ）作为检测指标，通过高内涵成像分析系统对 ＳＭＡ荧 体外肾纤维化细胞模型。高内涵分析（ｈｉｇｈｃｏｎｔｅｎｔ α 光表达强度进行检测分析，并对细胞种板密度、诱导时间、诱 ａｎａｌｙｓｉｓ，ＨＣＡ）是一种以细胞为检测对象，通过显微 导培养基中血清浓度等各种条件进行优化，建立稳定的肾纤 成像法对细胞内待测的指标信号进行采集并通过分 维化体外模型。在此基础上 以 ＴＧＦ１受体阻滞剂 ［６］ β 析图像中的信息来解析细胞内物质活动的技术 。 ＳＢ５２５３３４和姜黄素、大黄素对模型进行验证。并进一步探 ＨＣＡ技术可在保持细胞结构和功能完整的条件下， 讨吡非尼酮是否具有抗肾纤维化功效。结果　实验通过对 在单一实验中可以获得大量细胞信息以及候选药物 细胞密度、诱导时间、培养基中血清浓度进行优化，确立了可 药理学活性及潜在的作用机制等方面的相关信 用于高内涵分析的ＮＲＫ４９Ｆ肾纤维化体外模型的建立条件。 ［７］ 息 。在现代药物研发中，无论是药物的初级筛 ＳＢ５２５３３４、姜黄素、大黄素和吡非尼酮均能减少 ＴＧＦ１诱 β 选、靶点的发现与明确、候选药物的优化，还是在药 导的 ＳＭＡ过表达，抑制 ＮＲＫ４９Ｆ的活化。结论　实验建 α 立了可用于高内涵筛选技术的肾纤维化体外模型，并能相对 物临床前毒性和安全性的研究都具有明显的优 稳定地筛选具有抗肾纤维化作用的药物。吡非尼酮在本模 势［８－１０］。与普通肾纤维化细胞模型以及传统的成