检测肠出血性大肠埃希菌O157 H7 的环介导等温扩增和PCR 法比较.pdfVIP

·1026 · 南方医科大学学报（J South Med Univ ） 2012;32(7) 基础研究 临床研究 检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7 的环介导等温扩增和PCR 法 比较 1 1 1，2 1 1 1 姜 容 ，龙北国 ，曾桂芬 ，王 丹 ，范宏英 ，吴娴波 1 2 南方医科大学公共卫生与热带医学学院，广东 广州 510515 ；中国人民解放军第181 医院检验科，广西 桂林 541002 摘要：目的建立基于环介导等温扩增（LAMP）技术的肠出血性大肠埃希菌（EHEC）O157：H7 快速简便检测方法，并与PCR 进 行比较。方法 针对EHEC O 157：H7 保守的rfbE 基因序列，设计特异性引物，建立LAMP 和PCR 检测技术并优化其反应条件， 比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果 成功建立了LAMP 和PCR 检测体系，灵敏度检测结果 2 显示，LAMP 检测限低至10 cfu/ml ，PCR 检测限为10 cfu/ml ，LAMP 检测灵敏度高于PCR ；对39 株近源菌进行检测，结果显示， LAMP 法仅7 株EHEC O 157：H7 得到阳性结果，非EHEC O 157：H7 菌株均为阴性，PCR 产物则出现非特异性条带，LAMP 法特 异性比PCR 法高。对于32 份猪肉样品的检测，LAMP 和PCR 与常规检测结果一致，3 份样品检测阳性。结论 LAMP 检测技术 的特异性和灵敏度较PCR 高，并且操作简便、检测成本低，耗时短，更有望发展成为快速准确检测EHEC O 157：H7 的有效手段。 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157：H7 ；环介导等温扩增技术；PCR 技术；rfbE 基因 中图分类号：R446 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）07-1026-05 doi: 10.3969/j.issn. 1673-4254.2012.07.027 /kcms/detail/44.1627.R1443.009.html Loop-mediated isothermal amplification for detecting enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7: a comparison with PCR 1 1 1, 2 1 1 1 JIANG Rong , LONG Beiguo , ZENG Guifen , WANG Dan , FAN Hongying , WU Xianbo 1Department of Microbiology, School of Public Health and Tropical Medicine, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2Department of Clinical Laboratory, 181 Hospital of PLA, Guilin 541002, China Abstract: Objective To establish a rapid method of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for detecting enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157: H7. Methods Six primers that specifically recognized the rfbE gene of EHEC O157:H7 were designed. U