日本血吸虫SjPRMT1 基因的克隆, 表达及表达产物的免疫保护效果分析.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(4):835-841 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.04.022 日本血吸虫Sj PRMT1基因的克隆、表达及 表达产物的免疫保护效果分析 1，2 1 1 1 1 1 1 1 2 1 韩宏晓 ，彭金彪 ，洪 炀 ，王欣之 ，石耀军 ，傅志强 ，刘金明 ，程国锋 ，李祥瑞 ，林矫矫 1 2 （中国农业科学院上海兽医研究所/农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241 ； 南京农业大学动物医学院，南京 210095 ） 摘要：【目的】克隆和表达日本血吸虫精氨酸甲基转移酶1（ SjPRMT1）编码基因cDNA，分析其在日本血吸虫 不同发育阶段虫体的表达情况，评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建 的7 d童虫消减cDNA文库中，获得一个EST序列，经序列测定和生物信息学分析命名为SjPRMT1，以 Sj cDNA为 模板，获得其全长cDNA。荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况。以pET28a(+）为载体构建重组 表达质粒，Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性，利用重组抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果。 【结果】获得了SjPRMT1编码基因的全长cDNA，开放阅读框为660 bp，编码219个氨基酸。荧光实时定量PCR分 析该基因在18 d童虫高表达，13和23 d次之。获得了 SjPRMT1重组蛋白，其具有良好的抗原性和免疫原性。在 小鼠免疫试验中，与空白对照组比较，免疫组小鼠获得 35.07%的减虫率和 48.66%的肝脏减卵率。【结论】获得了 日本血吸虫童虫期高表达的SjPRMT1 基因的全长 cDNA，成功构建了 pET28a(+）-SjPRMT1 重组质粒，该重组抗原 在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。 关键词：日本血吸虫；精氨酸甲基转移酶1；克隆；免疫保护；小鼠 Cloning, Expression and Immunoprotection of the Novel Gene SjPRMT1 of Schistosoma japonicum 1,2 1 1 1 1 1 HAN Hong-xiao , PENG Jin-biao , HONG Yang , WANG Xin-zhi , SHI Yao-jun , FU Zhi-qiang , 1 1 2 1 LIU Jin-ming , CHENG Guo-feng , LI Xiang-rui , LIN Jiao-jiao 1 ( Shanghai Veterinary Research Institute/Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of A