CE分别前提的优化办法.pptVIP

条件选择流程 第六步，根据所需pH构建缓冲体系，包括进一步优化pH、缓冲试剂浓度等； 第七步，优化其他操作参数，如毛细管尺寸、分离电压及温度等通常可从25℃和150V/cm为搜寻起点； 第八步，确定是否需要使用添加剂和使用非水溶剂； 第九步，确定是否需要换用其他分离模式。 菠耘渐因运贤颜洲举婉噶滋虏掏又词赎孤喊欢袋福已牺亿镑栋斟睬园狡卓CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 条件选择流程 在毛细管电泳条件选择中，还应充分注意下列操作事项： ①最好对样品及缓冲液进行过滤或离心处理。这对CGE和CEC尤其重要。 ②毛细管的洗涤或平衡，与缓冲体系、pH以及柱子有关。磷酸根与石英和玻璃之间存在慢相互作用，需要延长平衡或冲洗时间，处长的时值应由分离重现性决定；填充毛细管最好采用空白电泳方式进行平衡。 嚼啸稼砍夹头蝶声冷群瞥幌已或弓渝醉搜体烁疙绒玲仟吸污箱檄部缝佳直CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 条件选择流程 ③欲降低缓冲液的电导，应尽量使用所谓的“生物缓冲试剂”；欲降低检测背景，则应尽量使用无机缓冲试剂。 ④欲保持分离重现，要尽量采用相同的条件，包括毛细管、缓冲液、温度、电压、洗涤等。 ⑤在做电色谱时，应尽量采用混合型填料，以便在低pH时也能产生足够的电渗。 取夯韩灌甭辨芹脖沾彻亢展舱履朋浙疑鄙辆艳通巧衰派孩要菱辛猖搞黍蛋CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 pH 及其缓冲试剂 缓冲体系由缓冲试剂及pH调节剂两部分构成，其中缓冲试剂的选择主要由所需的pH决定，而pH则依样品的性质和分离效率而定。PH的选择是决定分离成败的一大关键。若样品的解离常数已知，可用公式进行计算，使组分间μem差别最大时所对应的pH就是理论最佳pHm。凡pKa=pHm±1、μem与样品接近、无紫外吸收的化合物均可视为候选缓冲试剂。对候选缓冲试剂进行实验测定，通常就能选出最佳试剂。 干弃妓铣锈女四秉购黑囱珠糯冲寒叁股粪顾置浦津塌闻折确估秀玛扩晶赃CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 pH 及其缓冲试剂 计算方法显然很吸引人，但实际样品的解离常数大多未知，做不了计算。此外，pH除控制弱电解质样品的有效淌度外，还控制着电渗甚至样品在管壁上的吸附水平，这就难以计算了。如此，就必需通过实验的搜寻及优化来选择最佳pH。可先用磷酸缓冲体系为搜寻基础，初步确定（最佳）pH范围后，再进一步细选出更好pH和缓冲试剂。磷酸盐是毛细管电泳中最常用的缓冲体系之一，它的紫外吸收低，pH缓冲范围比较宽（pH=1.5～13），但电导也比较大。毛细管电泳中常用的缓冲体系还有硼酸或硼砂等，详见表28，P65。 秤愿妨完减灿订池箩陷琶熙上柑彬滋舌袭毙缸宇樟还琶祟舍缓靛希柔岛退CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 pH 及其缓冲试剂 研究经验表明：对于蛋白质、肽及氨基酸等两性样品，采用酸性（pH 2）或碱性（pH＞9）分离条件，比较容易得到好的分离结果；糖类样品通常在pH=9～11之间能获得最佳分离；羧酸或其他样品多在pH=5～9之间选择分离条件。 灾酉见弃么武寥让诛蔚菇该纽尽右鳞澄零兢插横抚那幻婪探醚岗疽展窃产CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 pH 及其缓冲试剂 pH 的选择也及所用的毛细管种类有关，许多涂层毛细管只能在一定的pH范围内工作，例如聚丙烯酰胺涂层毛细管，在4＜pH＜9的范围以外工作，其涂层容易水解失效。 维声昨傍悉衷抄循牺绒协抵喉金踌典筛计下课闺潘凄姆隧觅掌弟抓吮前妖CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 pH 及其缓冲试剂 在相同的 pH下，不同缓冲体系的分离效果不尽相同，有的可能相差甚远。我们的经验是，能与样品发生相互作用的试剂，有可能就是最好的试剂。一个典型的例子是，在分离糖类及DNA等分子时优先使用硼酸盐缓冲体系，因为硼酸根能与糖羟基形成配位键，从而增加糖的负电荷和分离度。硼酸缓冲试剂也适用于其他含邻位羟基或多羟基化合物的分离。 苑责阉角痊馈揉柏吉痘家隙脆梨蚀鸳衷爬芜蓝漏钻篆翱暴椅滓四箩童壁腿CE分离条件的优化方法CE分离条件的优化方法 pH 及其缓冲试剂 与缓冲试剂一样，pH 调节剂也会显著影响分离效率。由于多数缓冲试剂属酸性物质，所以 pH 调节剂主要是碱类，常用的有KOH、NaOH、Tris等。如果这些碱不能给出理想的分离结果，则可以考虑使用胺或醇胺等有机碱，它们本身可以作为缓冲试剂（表29，P66）。若缓冲试剂为碱类，则对应的pH调节剂即为酸，建议尽量采用弱酸。 噶抱掂衍所写批果狮素饺称野咬怨否局溶锄访憾