酶法结合膜技术制备精品肝素钠的工艺研究.pdfVIP

摘 要 本文研究了肝素钠的提取及纯化工艺：采用碱性条件下酶解的方法得到肝素 钠粗提液，通过膜技术除去粗提液中的杂质，然后，利用树脂吸附工艺纯化膜除 杂浓缩液，最后醇沉树脂洗脱液得到肝素钠，并且对比了几种干燥方式，最终选 取冷冻干燥得到产品肝素钠，实验得到的参数为工业化设计提供了基础数据。 在保证肝素钠生物活性的前提下，本文采用了先变性再碱性酶解的方法提取 肝素钠，料液比为 1:1，NaCl 浓度为 3.5%，温度 55℃，pH 值为 9.5，酶解时间为 3.5h 。此条件均比较温和，在避免了肝素在提取过程中丧失生物活性的前提下，获 得了比较高的提取率。肝素钠粗提液采用膜技术初步纯化，经过温度 40 ℃条件下， 操作压力为 0.2MPa 的微滤膜，能有效除去溶液中的大分子蛋白、悬浮颗粒、核酸 等杂质，同时肝素钠的透过率较高。微滤膜滤液采用两步超滤膜进一步除杂浓缩， 对肝素钠的截留率为 93%，浓缩倍数为 10 倍。整个过程达到了较好的除杂效果。 为进一步纯化膜除杂液体，本文研究了 D204 、D208 、D202 和 D254 四种树脂 吸附膜浓缩液体中肝素钠的能力，综合树脂成本，最终选用了 D208 树脂，该树脂 有着高效的吸附能力，也同样拥有较好的解吸率。在静态吸附实验中，确定了吸 附参数，pH 为 8.5、温度为45 ℃、吸附溶液中NaCl 浓度尽量控制在较低的范围。 采用动态吸附进行纯化时确定了上样量为 4 倍的树脂体积，流速为 2.0BV/h ，洗脱 液 NaCl 的浓度为4mol/L ，流速为 1.5BV/h。整个吸附洗脱过程中肝素钠的损失率 仅为 1.29%。同时考察了乙醇沉淀肝素钠所需的乙醇浓度，最后确定了冷冻干燥的 干燥方式得到肝素钠产品，并且，产品的单位效价达到 160U/mg。 本文还对肝素钠产品粉末的稳定性做了研究，验证了 pH 、温度、光照、氧化 剂等外在因素对肝素钠的稳定性的影响，为肝素钠的保存制剂环境提供了参考指 标。 关键词：小肠粘膜，肝素钠，膜分离，树脂纯化 I Abstract This paper researches the technology of extraction and purification process of the heparin sodium In this paper, Heparin sodium crude extracts was obtained through enzymatic hydrolysis under alkaline conditions, Useing the membrane technology to remove the impurities of heparin sodium crude extracts, and finally the useing of resin adsorption process to purify concentrated liquor of membrane. Finally, deposited heparin sodium in resin eluate by alcohol precipitation, and contrasted several drying methods, Ultimately selecedt the freeze-dried to get heparin sodium, experimental parameters provides the basis for the industrial design. Under the premise of ensuring the biological activity of heparin sodium, this paper first denatured and then alkaline enzymatic to extract heparin sodium, solid to liq