生化技术第一章.ppt

* * * * * 发酵液中目的产物浓度低，还含有大量的其他杂质，而目的产物的耐热、耐pH和耐有机溶剂性差，易变性失活。 传统工艺是溶剂萃取或加热浓缩，反复使用有机溶剂和酸碱溶液，耗量大，流程长，废水处理任务重。特别是许多药物热敏性强，使传统工艺受限制。 国际先进的制药生产线，大量采用膜分离技术代替传统的分离、浓缩和纯化工艺。 通常直接采用微滤或一级超滤去除大分子物质(菌丝、蛋白质、病毒、热原)，而小分子代谢产物(包括目的产物)、盐和水则透过微滤或超滤膜，然后再进一步进行超滤、纳滤 或反渗透进行纯化和浓缩。 6 发酵液的提取及精制 膜生物分离法的应用 水的纯化 固液分离 纯化小分子 浓缩大分子 去热原 膜生物反应器 传统用的方法是沉淀、过滤、加热、冷冻、蒸馏、萃取和结晶等过程,流程长、耗能多、物料损失多、设备庞大、效率低、操作繁琐等缺点，以膜技术取代某种传统技术可以获得显著的经济效益。 1 微生物菌体分离 利用微滤或超滤进行菌体或碎片的过滤分离是膜分离的重要应用，与传统的过滤相比： 滤液澄清，菌体回收率高 易于进行无菌操作 目前适合菌体含量低的液体 膜分离最大问题是污染引起通量下降， 如合理的解决膜污染和清洗问题，其将成为菌体分离的重要手段。 2 大分子的纯化与浓缩 根据大分子如酶的相对分子质量，选择适当的超滤膜，可进行酶的浓缩和除去小分子物质。 由于超滤膜的孔径有一定的分布范围，用超滤进行蛋白质的分级分离时，蛋白质之间的分子量需相差10倍以上，否则难以分离。 利用超滤法纯化蛋白质，其分子量、浓度、带电性质等与通量有很大关系，必要时须对料液进行预处理，同时减少膜对蛋白的吸附。 3 小分子产物的纯化与脱盐 氨基酸、抗生素、有机酸和动物疫苗等发酵产品的相对分子质量在2000以下， 发酵液进行固液分离后，用超滤法使蛋白、多糖等大分子被截留， 然后利用反渗透或纳滤法进行浓缩、脱盐和除去更小的杂质。 1）抗生素：庆大霉素Gen或链霉素Str浓缩和纯化 原工艺： 发酵液?过滤?离子交换?稀溶液?减压浓缩?去热源（活性碳）?喷雾干燥（结晶） 该工艺缺点：抗生素为热敏性物质，浓缩时，部分破坏，色泽加深；浓缩耗能大。改用膜分离： 膜分离技术的应用 2）在丙酮结晶母液中回收盐酸林可霉素： 原工艺：盐酸林可霉素→丙酮中结晶 → 丙酮母液(含盐酸林可霉素6％ ) → 低温自然沉降法回收，回收率1％-2％。 采用一般的纳滤膜来浓缩回收盐酸林可霉素，未获成功， 原因：母液中含有大量丙酮，一般纳滤膜不耐受有机溶剂。 Hydrochem公司发明了耐溶媒的纳滤膜，获得成功，总收率80％以上，结晶成品符合药典要求。 膜分离技术的应用 4 除热原 热源（pyrogen）又称细菌内毒素，是细菌新陈代谢和细菌死后分解的产物，主要成分是脂多糖、脂蛋白等，相对分子质量较大。 热源的致热效能很强，人比动物对热源要敏感，在静脉注射药液时，如果将热源带进血液，会对人体造成相当大的危害。 传统的针剂除热源的方法是活性炭吸附和石棉板过滤，前者造成产品损失，后者对劳动者和产品存在问题。 用超滤法可有效的除去热源，如产品分子量1000以下，可用截留分子量1万左右的膜比较合适。 思考题 1 理解概念：盐析，超滤。 2 蛋白质沉淀分离、核酸沉淀分离的方法有哪些？ 3 微滤，超滤，纳滤，反渗透分离技术的特点，及适用范围？ 4.膜生物分离法有哪些应用？ * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 透析原理图 水分子 大分子 小分子 透析膜 影响透析速度的因素： （1）半透膜的通透性：市面上有商品化的不同型号的透析膜，透析管；常用的半透膜是玻璃纸或赛璐玢纸、火绵纸或称赛璐琔纸和其他改型的纤维素材料。 （2）透析外液的更换：反复更换透析外液，增加透析速度；对流水透析，可进行初期透析；搅拌，使梯度差变得均匀，可增加透析速度。 （3）温度：温度增加，则透析速度增加，但要注意生物活性。 （4）压力：增加压力可加快透析速度，如真空透析。 透析法的应用 蛋白质、无机盐 无机盐 缓冲液 常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质， 有时也用于置换样品缓冲液。 由于透析过程以浓差为传质推动力，膜的透过量很小，不适于大规模生物分离过程、但在实验室中应用较多。 透析法在临床上常用于肾衰竭患者的血液透析。 2. 微 滤 以多孔薄膜为过滤介质，压力差为推动力，利用筛分原理使不溶性粒