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间接ELISA法测定转基因小鼠及肿瘤患者的血清中核 糖核酸酶抑制因子的表达 硕士研究生： 刘 字 指导教师： 刘基巍 教授 指导小组： 崔秀云 教授 燕秋 教授 专业名称： 肿瘤学 摘 要 肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一，目前占总死亡率的第二位。 研究表明，肿瘤新生血管的生成对于其增殖、浸润和转移起重要作用， 而且阻断肿瘤新生血管形成可以有效地抑制肿瘤的生长，甚至可以使 强的促血管生成活性，在一些恶性肿瘤发生、发展过程中起关键的作 用。核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,m)是一种分子量约 Ⅺ与Ang紧密结合后则可以有效地抑制Ang的促血管生成活性。 目前，检测砒最常用的方法是免疫印迹，该方法只能用于半定量 测定，且操作复杂、费时。酶联免疫吸附实验(ELIsA)技术，特点为 不但使结合于固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，且酶 标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留了酶活性。近年来， 用于抗原抗体检测的诊断方法报多，如免疫荧光技术、放免技术等， 其特异性、敏感性均较高，但与ELISA相比存在费时、成本高等缺点， 不易广泛推广。间接ELISA法具有特异、敏感、简便、价廉等优点， 制各成试剂盒后，极易实现在基础和临床研究中推广应用。 本课题旨在建立稳定、特异的间接ELISA方法，定量检测和分析 ‘1’ 血清中Rj的表达水平。本研究工作包括： I．建立检测血清中砒含量的间接ELISA方法，并分析该方法的 特异性和敏感性。 2．用所建立的间接ELISA方法对转砒基因小鼠不同时相血清中 RJ的含量进行检测，分析Iu基因表达的动态变化趋势。 3．用间接ELISA方法测定正常人及肿瘤患者(乳腺癌、胃癌、肝 癌、肺癌)血清中RJ的含量，分析和比较两组Ⅺ水平的差异。 结果： 1．所建立的用于血清中Ⅺ含量检测的间接ELISA方法特异性好， 灵敏度高，方法稳定： 2．通过对转Iu基因小鼠不同时相血清中Ⅺ的含量进行检测，发 现转基因4天后即有RJ表达，随后逐渐降低，到第三周左右时降到最 低，然后又开始上升，到第一月左右时达到高峰，而后又开始降低。 3．恶性肿瘤(乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌)患者血清中砒含量 下降，明显低于正常人(Po．05)。并且，乳腺癌患者与乳腺良性病变 患者血清中心水平比较，具有显著性差异(P《o．05)，而乳腺良性病变 患者与正常人血清中砌水平比较，则二者无显著性差异(PO．05)。 结论： 1．间接ELISA法可以用于定量检测血清中砒的含量，为进一步进 行试剂盒的研制打下基础； 2．血清中Iu的表达水平可以作为检验赳基因转染成功与否的指 标，具有一定的实用价值； 3．在恶性肿瘤患者体内Ⅺ的含量下降，提示对含量的测定可以 作为恶性肿瘤筛选的指标之一。 关键词：核糖核酸酶抑制因子酶联免疫吸附实验血管生长因子 肿瘤 ·2· The of RibonucleaseInhibitorinBlood Expression Serum ofIU Infected Gene Miceand TumorPatients IndirectELISA by Technique Master Yu