食管癌中DNA聚合酶β蛋白高表达与对顺铂产生耐药性之间的关系.pdfVIP

郑一11人学坝{·{i}|_宄生毕业论殳 食管埔中DNA聚合酶B盘自表达增加’』对顺铂产笙堕翌竺查型塑茎墨 食管癌中DNA聚合酶13蛋白表达增加与对顺铂产生耐 药性之间的关系 研究生 崔华娟 导师 董子明 郑州大学医学院病理生理教研室 中国郑州450052 摘要 背景与目的：食管癌是我国常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率都比较高。在 对其进行以顺铂(cDDP)为主的联合化疗时，常发生肿瘤对化疗药物耐受，从而影 响治疗效果。探明肿瘤对顺铂耐药的机制，对于增强化疗的作用，提高患者的生存 率，有着重要的意义。由于顺铂是细胞毒性药物，进入细胞后其作用靶点是细胞 阻滞于G2期或引起程序性细胞死亡。顺铂的耐药性产生涉及细胞的多种生化改变， 近年来，对耐药机制研究的重点主要放在DNA修复增强和对顺铂形成的加成物耐 受上。 B)是一种看家基因，从酵母到哺乳动物中高度保守。在 DNA聚合酶B(pol 短补丁碱基切除修复(BER)中起了重要作用。然而近年来越来越多的证据表明， B可能参与了长补丁碱基切除 polB还能参与更广泛的细胞反应。不少研究发现pol 修复，基因组DNA复制，DNA重组以及跨损伤DNA合成。在结肠癌，乳腺癌和 前列腺癌中，polB明显增高；在包括白血病、卵巢癌和结肠癌在内的某些对顺铂有 13的mRNA都是增加的。出现这些情况的原因可能在 耐药性的肿瘤细胞株中，pol e是一 B的表达升高，将干扰或取代细胞内其它聚合酶的正常功能。而且pol 于pol 0扩张的功能可能导致遗传不稳定 个错误倾向的聚合酶，其复制保真度低，故pol 及化疗耐药的发生。本实验的目的： (1)采用大剂量顺铂(10 lJ∥m1)反复间歇 24h暴露法，以食管癌鳞状上皮细胞株ECal09为基础，建立起顺铂耐药细胞株 B表达增高与 细f胜生物学特性之间的区别．以及polB表达水平的不同，以探讨pol 郑州大学坝}jf}}【_究生毕业论殳 食管拥中DNA聚台晦0盘白袁选增期l’j对顺铂产生耐药性之问的关系 顺铂耐药性产生之间的关系。 材料与方法 ℃，5％C02培养。以临床食管鳞癌化疗用药的最低计量换算终浓度，采用大剂量顺 u 铂(10 别计算出Ic50，求得耐药系数。采用细胞计数法记录两种细胞增长情况，绘制生长 曲线，计算出肿瘤细胞群体倍增时间。并在倒置显微镜下观察两种细胞形态变化， 流式细胞仪检测两种细胞的周期分布，提取两种细胞的核蛋白，用Western蛋白电 泳测定两种细胞内的DNApol 0质粒和野 B表达水平，将分别转染58bp缺失型pol 生型pol 细胞的抑制率，计算出IC50。 结果 皮样单层排列，细胞大小不一，为多角形；ECal09细胞边界清楚，核大，圆形或椭 圆形；ECal09／cDDP细胞边界不清，核大，不规则，细胞体积略增大，部分细胞变 细胞Go／GI期比例减少(P0．01)，s期比例增加(尸O．01)。 内pol 失型pol (P0．01)。 结论 B蛋白表达增加，从而引起DNA修复能力增强以及对于顺铂加成物形成耐受有关。 (3)由于DNA聚合酶B具有错误倾向，这种增加表达的聚合酶B极有可能产生了 食营璃中DNA聚合酶8蛋白表达