生物化学实验--Folin-Wu法定量测定.pptVIP

Folin-Wu法 定量测定血糖的含量 高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性高血糖症是糖尿病。 　糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病,系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。 症状＋随机血浆葡萄糖≥ 11.1mmol/L,或空腹血浆葡萄糖≥ 7.0mmol/L。症状不典型者需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任一时间采血测得的血糖浓度。 糖尿病典型的症状是“三多一少”，即多饮、多尿、多食及消瘦 掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。 学会制备无蛋白血滤液。 掌握7200型可见分光光度计的使用方法。 二、实验原理 葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。 Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖 Cu+ （Cu2O） 无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝 。 Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色 血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。 三、实验仪器 1、25mL血糖管×3支； 2、血糖管橡胶塞×3个； 3、沸水浴小锅×1个； 4、100mL锥形瓶×2个； 5、电炉×1个； 6、滤纸×1盒； 7、吸耳球×2个； 8、7200型分光光度计×1台; 5、酸性钼酸盐溶液： 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。 2、血糖的定量测定： 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。 一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。 七、思考题 实验过程中那些操作可能影响实验结果的准确性？ 实验中，血糖管有什么作用？ 实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？ 五、实验步骤 1、无蛋白血滤液的制备： 分光光度计的工作原理 朗伯-比尔定律 朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。 A=KLC 朗伯-比尔定律应用 7200型分光光度计的操作程序 连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。 接通电源，使仪器预热20分钟。 用MODE键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A），已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F）方式。 用波长选择旋钮设置您所需的分析波长。 将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入光路中，在T方式下按“0％T”键，此时显示器显示“000.0” 按 MODE键选择A模式 将参比样品拉入光路中，按“0A/100％T”键调0A/100％T，此时显示器显示的“BLA”直至显示“0.000”A为止。 当仪器显示器显示出“0.000”A后，将被测样品推入光路，这时，您便可从显示器上得到被测样品的吸光度。 * * 1型糖尿病也就是以前所称的青少年起病糖尿病、胰岛素依赖型糖尿病。1型糖尿病主要见于儿童或35岁以下的青年成人。在北美和欧洲国家比较常见。1型糖尿病患者的胰腺不能产生胰岛素，胰岛素又是身体利用葡萄糖和产生能量是必需的。这类型糖尿病需要每天注射胰岛素以维持生命。 2型糖尿病是糖尿病最常见的类型，2型糖尿病多见于30岁以上的成人和老年人。非洲、拉丁美洲、亚洲和本土美国人是2型糖尿病的高风险人群。