水稻二化螟和三化螟基因组ddradseq文库的构建-环境昆虫学报.pdfVIP

环境昆虫学报Journal of Environmental Entomology ，November 2016 ，38 (6):1114 － 1120 ISSN 1674-0858 doi :10. 3969 /j. issn. 1674 － 0858. 20 16. 06. 7 水稻二化螟和三化螟基因组ddＲADseq 文库的构建 1* 1，2 * 1 1 1 ＊ ＊ 1 ＊＊ ， ， ， ， ， 杨 琼 孙 娜 郑 敏 罗除成 罗光华 方继朝 (1. ， 2100 14 ;2. ， 210095) 江苏省农业科学院植物保护研究所 南京 南京农业大学植物保护学院 南京 : “ DNA ” (Double digest restriction － 摘要 本文介绍了构建水稻二化螟和三化螟 双酶切限制性酶切位点关联 测序 site associated DNA sequencing ，ddＲADseq) 。 2100 4 2 文库的方法 利用安捷伦 生物分析仪对 种单酶切及 种双酶切 ， MluC I Nla III DNA 的酶切产物片段大小及分布范围进行分析 筛选出 和 两种限制性内切酶组合对螟虫基因组 进行 。 DNA P1、P2 ， Pippin Prep 285 － 435 bp DNA 。 酶切 酶切后的 片段两端连接上特定的 接头后 用 回收大小为 的 片段 PCＲ index 。 ddＲADseq 通过 扩增进行文库的富集并引入 序列 构建好的 文库用琼脂糖凝胶电泳和生物分析仪进行质 。 DNA 、 Illumina 。 量检测 本方法所构建的文库 片段长度 分布和摩尔浓度能够达到 平台测序的技术要求 本研究证 MluC I Nla III ddＲADseq ， ddＲADseq 实了利用 和 组合酶切构建水稻螟虫基因组 文库的可行性 为在水稻螟虫中利用