基因工程载体图.DOC

分子生物学基础知识 基因工程载体（图） | [] [] 　　基因工程是要按人们的意愿去有目的地改造，创建生物遗传性，因此其最基本的工程就是要得到目的基因或核酸序列的克隆。分离或改建的基因和核酸序列自身不能繁殖，需要载体携带它们到合适的细胞中复制和表现功能。对理想的基因工程载体一般至少有以下几点要求： 　　①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。 　　②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。 　　③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。 　　④容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。 　　⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。 　　常用的载体有质粒，噬菌体和病毒等。 一、质粒载体 　　质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分。其特点如下： 　　①是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalently closed circuar DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300 kb之间，＜15kb的小质粒比较容易分离纯化，＞15kb的大质粒则不易提取。 　　②能自主复制，是能独立复制的复制子（autonomous