第二章 提取、分离与鉴定的方法与技术6.ppt

复习思考题 1.什么是重结晶？混合溶剂结晶时应该怎样选择溶剂？ 2.结晶的操作包括哪些步骤？ * * 第二章 天然药物化学成分提取分离和 鉴定的方法与技术 第一节 提取方法与技术 第二节 分离精制和鉴定的方法与技术 第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术 第二节 分离精制和鉴定的方法与技术 一、系统溶剂分离法 第二章 天然药物化学成分提取分离和鉴定的方法与技术 二、两相溶剂萃取法 三、沉淀法 四、结晶与重结晶法 五、透析法 六、分馏法 七、色谱法 学习目标： 1. 掌握结晶分离法的原理、溶剂选择的条件和操作技术。 2. 熟悉常用影响结晶法因素。 3. 了解透析法、分馏法和盐析法的原理和应用。 四、结晶与重结晶法 结晶法***：是利用混合物中各成分在某种溶剂中溶解度的差异，使某单一成分以结晶状态析出而与其他成分分离的一种方法。 1 结晶和重结晶概念 结晶：是指由非结晶状态到形成结晶的操作过程。 重结晶***：指由纯度低结晶处理成纯度高结晶的操作过程。 2 结晶溶剂的选择 关键 溶剂应符合下列件： ①不与有效成分发生化学反应。 ②对欲结晶的成分在热时溶解度大，冷时溶解度小，差别越大越好。 ③对可能存在的杂质冷热时溶解度均大，这样当溶液放冷时，有效成分析出结晶，而杂质仍留在母液中；或杂质在冷热时溶解度均极小，可先滤过除去。 ④有一定的挥发性，沸点不宜过高或过低。过高时，附着于结晶表面的溶剂不易除去；过低时，则有效成分溶解度冷热时变化不大，不利于结晶。 常用的溶剂有水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、苯、石油醚等。使用乙醚时应注意乙醚易燃，且易沿瓶壁爬行挥发，而使结晶析出于瓶壁上，影响结晶的纯度。 混合溶剂***：要能互相混溶 若使用两种溶剂时，其中一种溶剂要对有效成分较易溶解，最好是低沸点的，另一种要对有效成分难溶解，最好是高沸点的。 先加入一种有效成分易溶的低沸点的溶剂加热使样品溶解，再逐滴加入有效成分难溶的高沸点的溶剂，直到溶液稍变混浊，再微微加热使溶液变澄明，低温放置使有效成分析出结晶。 在放置过程中，若不析晶，可打开塞子，使其在室温中自然挥发，由于低沸点的溶剂易挥发，在溶剂中比例逐渐减少，有效成分就会慢慢析出结晶。 3 结晶的条件 关键 杂质的除去 有效成分的含量 溶液的浓度 温度 时间 4 结晶纯度的判断 初步鉴定：根据化合物的物理性质判断 结晶都有一定的结晶形状、色泽、熔点和熔距，这是非结晶物质所没有的物理性质。 熔点和熔距：一般单体化合物结晶熔距较窄，要求在0.5℃左右，如果熔距较长则表示化合物不纯，但也不能绝对化，特别是有些化合物的分解点不易看清楚，或分解点的距离比较长。还有些化合物重结晶前后熔点一致，熔距也很短，但不是单体化合物，很可能是立体异构体或结构非常类似的混合物。另外，化合物结晶的形状和熔点往往因所用溶剂不同而有差异。有的化合物具有双熔点特性，即在某一温度已全部熔融，当温度继续上升时又固化，再升温至一定温度又熔化或分解。这些情况都会影响到结晶纯度的判断。 有标准品的化合物，将结晶和标准品混合后测熔点，如果混合熔点不降、即可判断是单体化合物。 色谱分析法：也是实验室常用的鉴定纯度的简易方法。一般常用的有薄层色谱和纸色谱等。在薄层色谱或纸色谱上采用两种以上不同展开剂展层和不同的显色剂来检定，均为一个斑点者，一般可以认为是一个单体化合物。但应注意，有的化合物在一般层析条件下、虽然只有一个斑点，但并不一定是单体成分。因此，要依据具体情况综合分析。 判定结晶的纯度，必要时可采用高效液相色谱、气相色谱、紫外光谱等方法来检识结晶样品的纯度。核磁共振谱，尤其1HNMR也是判断结晶纯度的重要信息。 4 操作技术 通常将化合物溶于适当溶剂中，过滤，浓缩至适当体积后，塞紧瓶塞，静置或在低温下放置，使原来溶解的溶质成为有一定几何形状的固体（晶体）析出，析出晶体后的溶液仍是饱和溶液，又称母液。 结晶的方法： ①浓缩结晶法，也称蒸发溶剂法。对溶解度受温度变化影响不大的固体溶质适用。将溶液加热蒸发（或慢慢挥发），过饱和的溶质就能成固体析出。 ②降温结晶法，适用于溶解度受温度变化影响较大的固体溶质的结晶。先用适量的溶剂在加温情况下，将化合物溶解制成过饱和的溶液，然后再放置冷处，让其溶质从溶液中析出。 操作： (1)制备结晶溶液 (2)趁热过滤，除去不溶性杂质 (3)将滤液放冷，使析出结晶 (4)抽气过滤，将结晶从母液中分出 (5)重结晶 (6)晶体的干燥 结晶和重结晶操作： 提取或分离物 ↓溶于选择的溶剂，加热成饱和溶液，过滤 溶液 ↓放置（冷藏）析晶，过滤 粗结晶