等电聚焦电与泳.pptVIP

等电聚焦电泳 背景介绍 　　 等电聚焦电泳技术（isoelectric focusing，IEF）是1980年慕尼黑工业大学食品科学和化学分析研究所的Radola B J发展起来，并经国外一些种子检验实验室改进的一种非常实用的电泳技术，广泛应用于生物学的各个领域。 该方法是利用蛋白质具有两性解离及等电点的特征，加入有pH梯度的凝胶介质中，在电场内经过一定时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH位置上，形成分离的蛋白质区带。主要特点是：灵敏度及分辨率高、重复性好，特别适用于大批量纯度检测和真实性鉴定以及遗传多样性等群体生物学领域的研究。 基本原理 等电聚焦电泳(IEF)是利用两性电解质载体形成一个连续而稳定的线性pH梯度，将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中，当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷，向负极移动；若其处在高于其本身等电点的环境中，则带负电向正极移动。当泳动到其自身特有的等电点时，其净电荷为零，泳动速度下降到零，具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置 ，形成一个个清晰的区带，分辨率极高。 载体两性电解质pH梯度(carrier ampholyte pH gradient)等电聚焦，即在电场中通过两性缓冲离子建立pH梯度。 固相pH梯度(immobilized pH gradients,I