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- 2017-11-08 发布于湖北
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PCR技术培训讲座
Ct值 在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念—Ct值。C代表cycle,t代表threshold,Ct值的含义为每个反应管内荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,Ct值越小,起始拷贝数越多,反之亦然。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,就可从标准曲线上算出该样品的起始拷贝数。 PCR诊断试剂生产管理要点 1、应具有阳性血清(或阳性质粒)处理、分装的隔离实验室 2、PCR试剂的生产区与检定区应严格分开 3、专用原材料 PCR引物的设计要合理、合适,引物的合成要有固定的地方和设备,纯度能到达一定标准 荧光定量PCR试剂的质量检查操作程序 每次买来一批新试剂时,先观察外包装有无破损及有效期等,试剂运输过程中有无冷冻保存,如有异常,及时与厂家联系。 内包装:试剂是否漏液,真空包装是否破损,试剂是否齐全以及是否有使用说明书等。 试剂的灵敏度:取卫生部临检中心购买的已知拷贝数的血清1份,并稀释至10拷贝数,用新试剂检测,计算出灵敏度。 试剂的重复性:取从卫生部临床检验中心购买的已知拷贝数的血清1份,用新试剂稀释平行检测10次,计算出SD,CV%。CV%应在30%。 试剂的特异性:取临床标本10份(包括:低拷贝、高拷贝、阴性、高黄疸的标本各
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