酶工程1(中国药科大学生物工同程所有课件).ppt

第三章 酶工程 第一节 概 述 酶工程简介 酶工程（Enzyme engineering）是指通过化学方法、酶学方法和DNA重组技术改善自然酶的形成、结构和性质，提高酶的催化活性、降低成本并在大规模工业化生产中应用。 主要内容： 1 酶的制备和酶与细胞的固定化 2 酶反应器的设计和放大 3反应条件的控制和优化 ……. 酶工程的分类 化学酶工程：通过对酶的化学修饰或固定化处理，改善酶的性质，提高酶的效率和降低成本，甚至通过化学合成法制造人工酶，也称为初级酶工程； 生物酶工程：用基因工程技术生产酶以及对酶基因进行修饰或设计性能稳定、具有新的生物活性及催化效率更高的酶，也称为高级酶工程。 一、酶的定义 酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，按化学组成的不同主要分为核酸类酶（R酶）和蛋白质类酶（P酶）。 二、酶的分类与命名法 1 习惯命名法 底物名称： 淀粉酶、蛋白酶 催化反应性质：氧化酶、转氨酶 底物结合催化反应性质：胆固醇氧化酶、醇脱氢酶 来源：心肌黄酶、含铁酶 缺点：无系统性，一酶数名或一名数酶。 2 系统命名法与分类 国际生化联合会（IUB）酶学委会于1961年规定了酶的统一命名法及分类原则。 系统命名法：酶的名称由底物及反应类型两部分组成。 六大类：氧化-还原酶、转移酶、水解酶、裂合酶、异构酶和连接酶。 三、酶的结构和特性 1 酶的结构 酶的组成成分 单纯酶——仅由蛋白质组成的酶。 结合酶——除蛋白质外，还有非蛋白质的成分。 全酶=酶蛋白+辅因子 辅因子有两种：辅酶和辅基 根据酶的聚合状态，酶可以分为三类： 单体酶 寡聚酶 多酶复合体 酶的活性中心指酶分子中直接和底物结合，并和酶催化作用直接相关的部位。 组成： 由一些氨基酸残基的侧链基团组成。这些基团在一级结构上可能相聚很远，甚至可能不在一条肽链上，但在蛋白质空间结构上彼此靠近，形成具有一定空间结构的区域。 对于结合酶，辅因子常常是活性中心的组成部分。 酶活性中心的特点： 活性中心在酶分子总体积中只占相当小的部分（1-2%），相当于2-3个氨基酸。 都是酶分子表面的一个凹穴，有一定的大小和形状，但不是刚性的，而具有一定的柔性。 活性中心为非极性的微环境，有利于与底物结合。 底物与酶通过形成较弱键力的次级相互作用并结合到酶的活性中心。 酶的活性部位并不是和底物的几何图形正好吻合，而是在酶与底物结合的过程中，底物分子或酶分子或它们两者的构想同时发生一定变化后才能相互契合，这时催化基团的位置也正好处于所催化底物的敏感化学键部位。 2 酶的特性 ①催化效率高 ②专一性强 ③反应条件温和 ④催化活性受到调节和控制 四、酶的来源 酶作为生物催化剂普遍存在于动物、植物和微生物中，可直接从生物体中分离提纯。 酶的生产方法可分为提取法﹑发酵法以及化学合成法。 化学法仍在实验室阶段； 提取法是最早采用且沿用至今的方法，如从动植物组织液中提取胰蛋白酶和菠萝蛋白酶； 发酵法是50年代以来酶生产的主要方法，如生成葡萄糖异构酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶等。 五、酶促动力学 六、酶的分离纯化与酶的活力测定 1 酶的分离纯化 细胞外酶和细胞内酶 在生物细胞内除了目标酶还有很多其他的酶，因此需要分离和纯化的步骤。 基本步骤： 破碎细胞膜 抽提 纯化 比活力：纯度的量度，指每毫克质量的蛋白质中所含的某种酶的催化活力，一般用单位/毫克蛋白（U/mg蛋白质表示）。酶的比活力越高，酶的纯度也就越高。 纯化倍数=每次比活力/第一次比活力 产率%=每次总活力/第一次总活力 2 酶的活力测定 1个酶活力国际单位是指在特定条件下，1min内生成1μmol产物的酶量（或转化1 μmol 底物的酶量）。 第二节 酶和细胞固定化 酶固定化技术发展史 20世纪60年代，以色列科学家发现酶的固定化现象。 1969年，千畑一郎等将固定化氨基酰化酶应用于生产L-氨基酸，开创了固定化酶应用于工业生产的先例； 1971年召开的第一届国际酶工程会议上，建议采用统一的英文名称Immobilized Enzyme； 1973年，固定化大肠杆菌菌体中的天冬氨酸酶连续生产L-天冬氨酸。 1986年，利用固定化原生质体发酵生产碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶等相继获得成功。 一、固定化酶的制备 ⒈固定化酶的定义： 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 广义的固定化酶包括： 固定化辅酶；固定化细胞；固定化细胞器 为了减少从微生物或者其他生物体中提取酶的麻烦，有时为了充分利用生物细胞的多酶系统，开发另外一种固定化催化剂的形式，固定化细胞。 ⒉固定化酶的特点 具有生物催化剂的功能