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自动化蛋白质沉淀样品制备实现高通量生物 分析 应用简报 生物医药 作者 摘要 Mike Chang 对于生物基质中化合物的液质分析，样品前处理的蛋白质去除步骤是必不可少的。蛋白 Agilent Technologies, Inc. 质沉淀及离心是最常见的蛋白质除技术之一。然而，由于涉及多个手工操作步骤，它不 25200 Commercentre Drive 适合高通量分析。基于 96 孔板的全自动蛋白质沉淀系统能够显著减少高通量分析实验室 Lake Forest, CA 92630 进行样品制备所需的时间、成本和人力资源。 安捷伦推出了全新的无液滴技术的蛋白质沉淀过滤板 Captiva ND ，它操作简单，特别设计 的过滤材料能够有效地保留用于沉淀的有机溶剂，且不产生液滴。这种设计防止了样品 损失，能够运行可靠的自动化方法。只需简单地在孔中依次加入有机溶剂和生物样品， 充分混合，然后加真空将蛋白质过滤掉。在几分钟内就可以得到不含颗粒、不含蛋白质 的样品，比传统的离心方法快 5 倍。 方法和材料 试剂和溶液 在 10 mL 乙腈中加入 10 µL 甲酸，制成含 0.1%甲酸的乙腈蛋白质 沉淀溶剂。 使用 Captiva ND 进行样品前处理 固相萃取：安捷伦 Captiva ND 96 孔板, 0.45 µm, 10 mg (p/n A5969045) 。 图 1. 使用 Captiva ND 进行样品前处理的流程。 加入 600 µL 含 0.1%甲 加入 200 µL 含b -阻断 用移液器混合三次，然 直接放到自动进样器上 酸的乙腈溶液 剂的人血浆 后连接真空，收集 96 孔 进行分析 收集板上的过滤溶液 图 1. Captiva ND用于样品前处理的流程图 离心进行蛋白质沉淀的样品前处理 离心机：Eppendorf 离心机 5424 ，配置 24 位离心管支架 1. 加入 600 µL 含 0.1%甲酸的乙腈和 200 µL 添加b -阻断剂的 人血浆 2. 在 10000 RPM 下，离心 10 分钟以上 3. 如果需要，过滤上清液 4. 小心地将（过滤的）上清液转移至自动进样器的样品瓶进行 分析 2 液相色谱条件 1200 色谱柱 安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus RRHD C18, 1000 2.1 × 5.0 mm, 1.8 µm (p/n 959757-902) LC/MS/MS 安捷伦 1290 Infinity UHPLC 与普通质谱系统联用 800 流动相 A 0.1% 甲酸水溶液 ) r a b