萌发小麦种子中淀粉酶学性质研究.doc

摘要：本研究以萌发的小麦种子为材料，提取得到淀粉酶液。利用分光光度计法测定淀粉酶分解淀粉所得还原糖与3,5-二硝基水杨酸的还原产物的吸光值，从而得出酶活标准曲线。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶对温度的差异，采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测定出α-淀粉酶的活性为26.00 mg.g-1 鲜重5min-1。在非钝化条件下测定淀粉酶的总活力为399.82 mg.g-1 鲜重5min-1，进一步得出β-淀粉酶的活性为373.82 mg.g-1 鲜重5min-1。研究影响淀粉酶活性的因素，在不同温度、不同pH值，激活剂和抑制剂的条件下由酶反应混合物遇碘呈现的颜色判断出酶活性的最适温度为40 ℃，最适pH值为5.6，NaCl为激活剂，CuSO4为抑制剂。通过研究淀粉酶的性质使我们更充分地了解，并利用于工业生产、食品加工、医疗等产业。关键词：淀粉酶；酶活性；温度；pH值；激活剂和抑制剂。 引言 酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成,只有在适当的温度、pH和离子强度下才具有生物活性。而且生物体内的各种代谢变化都是由酶驱动的,酶既能催化各种生化反应，还能调节和控制代谢的速度、方向和途径,是新陈代谢的调节元件。淀粉酶广泛分布于植物和动物体内，特别是萌发谷物种子。它具有水解淀粉的能力，对生物有很大的影响作用。而淀粉是植物最主要的储藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。因此研究淀粉酶有重要的意义。现代酶学正向着两个方向发展：酶的分子生物学和酶工程学，它们是现代生物技术的重要组成部分，应用范围包括医药，食品，化学工业，诊断分析和生物传感器，涉及的品种不少，如淀粉酶，其市场需求生产规模和产值均很乐观，并已产生巨大经济效益。 1.材料与方法 材料 实验材料为小麦（Triticum aestivum L.），由东北农业大学生命学院生化实验室提供。 方法 1.2.1淀粉酶粗酶液的提取 称取1 g萌发3 d的小麦种子（芽长约1 cm），置于研钵中，加入少量石英砂和2 mL蒸馏水，研磨匀浆。将匀浆倒入刻度试管中，定容至25 mL。提取液在室温下放置提取15-20 min，每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。然后在4000 r/min转速下离心10 min，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶粗酶液。 1.2.2 酶活力的测定 1.2.2.1酶活测定标准曲线的制作 取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表加入试剂 管号 1 2 3 4 5 6 7 麦芽糖标准液/ml 0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 蒸馏水/ml 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 0 麦芽糖含量/ml 0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 3,5-二硝基水杨酸/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 光密度值 摇匀，置沸水浴煮沸5分钟。取出后流水冷却，加蒸馏水定容只20ml. 以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定光密度。以麦芽糖含量为横坐标，光密度纵坐标，绘制标准曲线。 实验数据的记录如表 麦芽糖含量/mg 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.0 光密度值 0.010 0.043 0.084 0.130 0.184 0.204 标准曲线如图 1.2.2.2淀粉酶活力测定 取6支试管，编号，按下表操作。 酶活力的测定 操作项目 α-淀粉酶活力测定 酶活力测定 Ⅰ-1 Ⅰ-2 Ⅰ-3 Ⅱ-1 Ⅱ-2 Ⅱ-3 淀粉酶原液/mL 11.0 1.0 0 0 0 钝化β-淀粉酶 置70 ℃水浴15 min，冷却 稀释液/mL 0 0 0 11.0 1.0 3,5-二硝基水杨酸/mL 2.0 0 0 2.0 0 0 预保温 将各试管℃恒温水域中保温10 min 1%淀粉溶液/mL 保温 在40恒温水浴中准确保温5 min mL 0 2.0 2.0 0 2.0 2.0 将各试管摇匀，显色后520 nm处进行比色测定光密度，记录测定结果。 1.2.3 温度对淀粉酶活性的影响 取8支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。 温度对淀粉酶活性的影响 管号 A a B b C c D d 缓冲液（H5.6）/mL 1 - 1 - 1 - 1 - 淀粉溶液/mL 2.5 - 2.5 - 2.5 - 2.5 - 淀粉酶提取液/mL - 1 - 1 - 1 - 1 预保温/min 4℃ 室温 40℃ 沸水浴 混合 A倒入a中 B倒入b中 C倒入c中 D倒入d中 酶促反应（10min） 4℃ 室温 40℃ 沸水浴 碘液 各3滴（滴管应先冷却至室温） 显色 管号 缓冲液/mL 2（H3.0） 2（H5.6）