大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞生殖细胞长期共培养与精子发生分析.PDFVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(5): 454–460 http ://www.cj 大鼠睾丸曲细精管组织支持细胞/生殖细胞长期共 培养与精子发生分析 刘林洪　史小芳　罗奋华　于泊洋　张　岩　刘　燕　吴应积* ( 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学和生物技术教育部重点实验室, 呼和浩特01002 1) 摘要 睾丸体外生殖模型的发展为体外研究睾丸的精子发生分子机制和睾丸毒理学提供了 实验工具。很多报道的模型都无法真正地模拟体内复杂的生化分子及功能性相互作用从而导致研 究价值有限。该实验拟建立一个体外长期维持睾丸生殖细胞存在, 并能持续产生精子细胞的支持 / 细胞生殖细胞共培养体系。体系中的支持细胞和生殖细胞均由曲细精管组织块迁移到培养皿上, 2 RT-PCR 在不添加任何生长因子的情况下维持体外精子发生至圆形精子细胞超过 个月。 分析显示, cdh1 scp3 tnp2 CDH1 PLZF SCP3 SOX9 共培养细胞稳定表达 、 、 ; 免疫荧光染色结果显示, 、 、 以及 阳性细胞存在。这些结果例证了体系中同时存在精原干细胞、精母细胞、精子细胞和支持细胞。 / 简单高效的支持细胞生殖细胞体外共培养体系可用于雄性生殖的分子机制和毒理学研究。 关键词 大鼠; 睾丸生殖细胞; 支持细胞/生殖细胞共培养; 体外精子发生 精原干细胞(spermatogonial stem cell, SSC)作为 这些缺陷不利于对生精过程的反复观察和研究, 也 生殖干细胞, 在濒危物种种质资源保存、转基因动 不利于研究长期药物处理对生精过程的影响。所以, 物制作、精子发生机理及男性不育症上发挥着不 一个能长期维持精子发生的体外培养体系能让我们 SSC 的研究更接近体内状态。 可替代的作用。随着对 的迁移、增殖、分化以 及凋亡等调节机制的研究及精子发生机理的研究 近几年研究表明, 绒山羊与大鼠的睾丸支持细 SSC 胞与生殖细胞共培养体系原代培养, 能够长期维持 和 异体、异种移植技术的发展, 都迫切需要找 SSC [1] 4 到一种可行的方法开展 体外增殖与分化研究 。 体外精子发生过程直至产生精子细胞, 时间长达 个 SSC [9-10] 虽然 的分离纯化方法已经在一些物种上获得了 月 。其方法为模拟体内精子发生过程研究提供 成功[2-4] SSC [2-3] 了组织细胞模型。可是, 此组织细胞模型还很不完 , 并且实现了少数动物 的长期培养 以 SSC [5] SSC 善, 比如只是对不同的生殖细胞进行形态观察和细 及 体外分化成有功能的精子 。但是, 的体 SSC 胞行为特征的描述, 没有从分子水平对各级生精细 外鉴定, 尤其是大动物 的体外鉴定, 一直缺乏特 SSC SSC 胞进行标记分子特异表达的分析鉴定。 异性的标志; 已有的大鼠 鉴定标志多为体内