农药的代谢-2017年11月.pptVIP

EROD CYP1A1 MROD CYP1A2 PROD CYP2B1/2B2 ethoxyresorufin methoxyresorufin pentoxyresorufin 酯酶 羧酸酯酶（B-酯酶 ，EC 3.1.1.1 ）——马拉硫磷 芳基二烷基磷酸酯酶（A-酯酶 ，EC 3.1.8.1 ，对氧磷酶 ） 酯酶在害虫有机磷的抗性中起着极为重要的作用，在对氨基甲酸酯和拟除虫菊酯的抗性中也起一定作用。 酯酶在抗性机制中具有两个作用 通过水解作用产生无毒代谢产物 结合作用杀虫剂，形成磷酰化酶或氨基甲酰化酶，使杀虫剂不能到达靶标。 两者均能起到保护体内靶标－乙酰胆碱酯酶免受抑制。 酯酶与抗药性 酯酶参与的代谢反应 酰胺（水解）酶——乐果 芳基酰胺（水解）酶——敌稗 环杨化物水解酶——西维因 酯酶的检测 酯酶可水解α-醋酸萘酯为醋酸和α-萘酚。后者与固蓝B盐反应生成一个蓝紫色物质（λ=550～600纳米nm）。 酯酶的检测也可以用β-醋酸萘酯作底物，产物呈紫红色。 pH对显色反应有很大影响。 染液中可加入4~5%的SDS，一来增色，二来终止反应。 α-和β-醋酸萘酯为非特异性底物，检测昆虫酯酶时，可在反应体系中加入10-7 mol/L左右的毒扁豆碱，以消除胆碱酯酶的活性 。 毒扁豆碱不能排除其它酯酶，如A-酯酶的活性。 所幸A-酯酶一般只存在于哺乳动物体内。 谷光甘肽-s-转移酶（ GST ） 根据底物的不同， GST （EC 2.5.1.18 ）又可以分为谷胱甘肽-S-烷基转移酶、谷胱甘肽-S-芳基转移酶和谷胱甘肽-S-环氧化物基转移酶。 以还原型glutathione（甘氨酸＋胱氨酸＋谷氨酸）作为辅酶 无论哺乳动物动物，还是昆虫体内的GST，多以二聚体形式存在。根据等电点的不同，可以分为碱性（α）、中性（μ）、酸性（π）三种类型 GST参与的代谢反应 西维因carbaryl 阿特拉津atrazine GST参与的代谢反应 二嗪农diazinon 对氧磷paraoxon GST的检测——谷胱甘肽-S-烷基转移酶 以14C标记的碘甲烷为底物，在酶的催化下，碘甲烷与谷胱甘肽生成不挥发的衍生物，未反应的碘甲烷以溴甲醇除去，通过对标记物的测定求出酶活性： GST的检测——谷胱甘肽-S-芳基转移酶 以1，2-二氯-4-硝基苯（DCNB）或1-氯-2，4-二硝基苯（CDNB）为底物 DCNB或CDNB与还原型谷胱甘肽产生轭合物，在360纳米波长下有最大吸收峰 据Fournier（1995）等的报道，家蝇体内的谷胱甘肽-S-转移酶可分为两种：酶活性的最适pH为酸性（6.5）的种类对1-氯-2，4-二硝基苯（CDNB）活性高，最适pH为碱性（8.0）的种类对1，2-氯-4-硝基苯有较高活性(DCNB)。 葡萄糖醛酸转移酶（glucuronyl transferase） 主要存在于哺乳动物体内。 辅酶：尿嘧啶核糖焦磷酸葡萄糖醛酸（UDPGA） 葡萄糖醛酸转移酶参与的代谢反应1 西维因carbaryl 葡萄糖醛酸转移酶参与的代谢反应2 福美铁ferbm 硫酸转移酶（sulphate transferase, sulfotransferase ） 存在于哺乳类、两栖类、无脊椎动物体内 辅酶：3’-磷酸腺嘌呤 5’-磷硫酸酯（PAPS） 3’-磷酸腺嘌呤 5’-磷硫酸酯（3’-phosphoadenosyl 5’-phosphosulphate, PAPS） 硫酸转移酶参与的代谢反应 甘氨酸转移酶 存在于植物体内 以甘氨酸作为辅酶 反应类型： 麦草畏dicamba 葡萄糖转移酶 存在于植物体内 以葡萄糖作为辅酶 葡萄糖转移酶参与的代谢反应 氯黄隆chlorsulfuron 氯黄隆在小麦、大麦中降解快，而在大豆、甜菜等敏感作物中降解慢。 葡萄糖转移酶参与的代谢反应 氯苯甲醚chloroneb 农药的代谢 代谢研究方法 活体研究in vivo 离体研究 in vitro 组织匀浆 沉淀（细胞核、组织碎片） 滤液 上清液 沉淀（叶绿体） 上清液 沉淀（线粒体） 上清液（胞液、核糖体 ） 沉淀（微粒体） 100,000~105,000g, 1hr 9,000~11,000g, 30min 1,000~3,000g, 10min 过滤 代谢酶 初级代谢酶 水解酶、多功能氧化酶（MFO） 次级代谢酶 谷光甘肽-s-转移酶（ GST ）、葡萄糖醛酸转移酶（glucuronyl transferase）、硫酸转移酶（sulphate esterase）、甘氨酸转移酶、葡萄糖转移酶 多功能氧化酶（MFO） R