Agilent1260高效液相色谱仪操作规程.doc

1、目的 确保Agilent 1260高效液相色谱仪的正确使用及管理。 2、范围 研发分析中心实验室Agilent 1260高效液相色谱仪。 3、责任 仪器使用者对本标准的实施负责。 4、内容 4. 1 开机 4.1.1打开计算机，进入Windows 画面。 4.1.2自下而上打开1260LC各模块电源，待各模块自检完成后，双击电脑桌面上LC1260-1(Online)图标，化学工作站自动与1260LC通讯，进入工作站画面。 4.1.3单击【View】菜单选择【Method and Run control】项，也可单击工作站 画面左下角【Method and Run control】项，进入方法和运行控制窗口。 4.2 安装色谱柱 正确安装实验所需的色谱柱，注意色谱柱流速箭头方向，试验过程中需检查是否存 在漏液。 4.3 溶剂瓶体积设置 把事先配好的流动相倒入相应的溶剂瓶中，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下【Bottle filling】，在参数设置处输入各溶剂瓶（A、B、C、D）内溶液实际体积和停泵体积，单击【OK】键，即可。 4.4 设置【Seal wash】 单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在seal wash这栏中选择“On”, 清洗功能开始运行，并设置清洗时间，每隔5min清洗0.1min。 4.4 脱气 逆时针旋开Purge阀，单击【instrument】菜单,选择【More Quat Pump】项下“control”, 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行。设置“solvents”一栏中相应参数，将试验 中所用到的管道逐一脱气，直至管内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止所需时间， 3ml/min冲洗大约需5min～10 min ,,完成后选择“off” , 单击OK键关泵，顺时针旋 紧Purge阀。 4.5 平衡色谱柱 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】项下 “Quat Pump”, 在 “solvents”一栏将试验中要用到的有机相通道（甲醇/乙腈）设置为100%，并将 “Flow”从低流速逐级设为1ml/min， 在“pump”这栏中选择“On”,泵开始运行，冲 洗约10min钟后，设定与测试方法相同的柱流速和流动相比例平衡色谱柱(梯度采 用起始流动相比例)，冲洗 min ～60 min。若 测试方法用到缓冲盐作为流动相，还需10%甲醇或乙腈水溶液冲洗过渡色谱柱， 约30min，再设置为流动相得比例，平衡色谱柱。 4.5 方法编辑 4.5.1 进样体积设定 标准进样： 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择“Sampler”模块, 在“Injection Volume”处输入进样体积，选择“Standard Injection”方式，单击OK键即可。 带洗针进样：单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】, 在此窗口上方选择“Sampler”模块, 在“Injection Volume”处输入进样体积，选择“Injection with needle wash”方式，单击OK键即可。此方式进样后会在事先放置的洗瓶中洗针，减少样品残留此种方式比较，比较适合 4.5.2 柱温设定 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，此窗口上方选择 “column” 模块,输入柱温，左右两边柱温要保持一致。 4.5.3 泵参数设定 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择 “Quat Pump” 模块, 在“Flow”处输入所需的流速，在“solvents”处输入各通道的溶液比例,若实验为梯度洗脱程序，则需在“Timetable”下编辑，输入相应的时间和流动相比例。“Stoptime”为运行停止时间，“Posttime”指的是两次运行之间流动相的平衡时间，一般剃度洗脱需设置这一项。 4.5.4 检测波长设定 单击【instrument】菜单,选择【Set up Instrument Method】，在此窗口上方选择“DAD”模块,输入检测波长和带宽，一般带宽设置为4nm,参比波长视情况设定，一般不需要设定。 4.5.5 样品信息设定 单针进样：单击【Runcontrol】菜单,选择【Sample info】,在弹出窗口“Path” 处输图