人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤自噬相关基因表达的检测-外科学(胸心外科)专业毕业论文.pdfVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 前 言 随着环境污染的日益严重，肺癌的发病率呈逐年升高的趋势，75% 以上的肺 癌患者经确诊后，疗效欠佳，生存率较低，目前肺癌是全世界癌症死因的第一名， 也是我国恶性肿瘤死亡原因之首位,死于肺癌死亡患者每年约有 60 万。在传统的 手术治疗、化疗、放疗效果不佳的情形下，必须寻求更多更有效的治疗方法。研 究表明自噬与肿瘤生长有关，能否通过对自噬过程的调节来控制肿瘤的生长，从 [1] 而使得自噬成为肿瘤治疗新的靶点，是目前研究的热点 。 自噬是真核细胞蛋白降解的重要途径，于细胞质内半环状双层或多层膜结构 的形成，包绕细胞质及细胞器，然后形成自噬体，与溶酶体融合形成自噬溶酶体， 最终经过蛋白酶降解其成分[2，3] 。虽然研究表明肿瘤细胞的自噬能力低于同种组 织的正常细胞，但自噬在肿瘤形成的过程中是促进肿瘤的生长还是抑制肿瘤的生 长，目前尚没有定论[4] 。自噬能够降解细胞内细胞器和一些相关蛋白，使得蛋白 缺乏可遏制肿瘤细胞增殖，过量自噬导致的自噬性死亡可以杀灭肿瘤细胞；但同 时在肿瘤生长早期，瘤细胞持续生长增殖，瘤体内部供血减少，癌细胞利用自噬 机制对此种不良情况，在肿瘤生长的后期，肿瘤中央缺血区域的癌细胞处于营养 [5] 缺乏及缺氧的环境，同样可利用自噬机制而存活 。自噬还可通过清除因放疗化 疗而受损的细胞器，保护癌细胞，使癌细胞逃避死亡，继续存活[6] 。此外，在许 多肿瘤细胞中自噬水平并没有降低，如结肠癌和肺癌细胞均有着很高的自噬活 性，人肺鳞癌细胞的自噬水平与正常细胞相比并没有下调[7，8] 。从此可得出，自 噬在肿瘤中的作用是双重的, 自噬与肿瘤的关系需进行进一步的研究。 无胸腺裸鼠（Nude ，简称裸鼠）是根据肿瘤学和免疫学研究的需要发 展而来的动物模型,现已成为研究领域中应用广泛的实验动物模型。它在肿 瘤学、免疫学、药品的安全性评价实验方面，有着特殊的价值。接种于裸 鼠的肿瘤对于化疗药物的敏感性和临床观察十分接近。移植于裸鼠的肿瘤 可以保持肿瘤原有的组织学构造及各项机能，将人肿瘤细胞接种于裸鼠时， 可以重现在人体中原有的癌结构。裸鼠因缺乏 T 细胞，易受各种感染的损 害，因而必须严格的控制种植肿瘤细胞的数量。现裸鼠用于人癌裸鼠移植 瘤建立的技术已日益成熟 [9] 。 3 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 对于自噬，目前细胞水平的实验进行的较多，而在活体动物模型水平则相对 较少，我们可通过建立裸鼠肿瘤模型，进一步探讨自噬与肿瘤生长的关系，为自 噬成为肿瘤治疗的新靶点提供理论根据及实验依据。 4 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 一 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物: BALB/c nu/nu 裸鼠80 只,雄性,3-4周龄,体重8.8-10.4g，购自华中科 技大学同济医学院动物中心，于SPF环境内生长，人肺癌细胞株A549来源于华中 科技大学协和医院保藏中心。 1.1.2 试剂：一步法试剂盒购自武汉凌飞公司，Trizol 试剂购自 Santa cruse 公司。 1.1.3 实验仪器：CO2 孵箱，HeraeusBB16UV 型，德国 Heraeus 公司生产；台式 低温离心机，5180R 型，德国 Lieca 公司生产;PCR 仪器，美国 Effendorf 公司生 产。 1.1.4 药物：注射用顺铂为山东齐鲁制药厂生产，用RPMI1640 配置成 100mmol/L 储存液，过滤除菌后 4 ℃保存备用，临用前用含 10%小牛血清的 1640 稀释至所 需浓度。 1.1.5 培养基：RPMI1640 培养液、小牛血清为美国 Gibco 公司产品，使用前配 置成含 15%小牛血清的 1640 培养基。 1.1.6 其他试剂：胰酶；Sigma 产