人骨质疏松候选基因MGP基因的cDNA克隆及其蛋白表达初探-内分泌和代谢病(内科学)专业毕业论文.pdfVIP

中南大学硕士学位论文 中文掩要 人MGP基因的eDNA克隆及其蛋白表达初探 研究生杨雅导师王平芳教授 摘 要 达蛋白MGP。方法利用反转录聚合酶链反应(RT．PCR)从正常人肺 组织总RNA中扩增出人MGP基因编码区eDNA序列，将其克隆至 体切下后与表达载体pTrcHisB连接，转化入大肠杆菌Topl0，测序 无碱基缺失及突变后，用IPTG诱导蛋白的表达，取细菌的沉淀，经 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳后初步判断有无MGP的表达。用 厂 Western 基因编码区eDNA序列与基因库中完全一致，无突变与缺失发生。 突变的发生，经IPTG诱导后有蛋白的表达，表达蛋白的分子量与预 计相符。经Western 、，pk一／ 诱导后2、3、4小时蛋白的表达量显著。／结论{正常人肺组织内存在 IPTG MGP基因的表达，己成功克隆出完整的MGP基因eDNA序列， 能够诱导其在大肠杆菌中的表达，蛋白的表达量为时间依赖性。 关键词-MGP；eDNA克隆；序列分析；蛋白表达。 中南大学硕士举位论文 英文摘要 ofHumanMGPGenecDNAand Clong of MGP EarlyStudy Expression Abslract obtainthehumanMGP eDNAand Objective：To gene clongto makeeDNAofMGP inE．coli expressprotein withtotalRNAfrom MGPeDNAwas normalhuman amplified hmg tissue cloneditinto vectorand RT·PCR，then pGEM—Teasy sequenced by LinkMGPcDNAfrom vector to vector cloningpGEM—Teasyexpression andtransformatethemto E．coli eDNA pTrcHisB ToplO．Sequnce vector．Ifitisnotmutation whichlinkedtoexpression in orabsence，we inducethe MGP thesedimentthen protein expressionbyIPTG．Acquir detectthe SDS andwestern by