使用液相色谱法联合串联质谱法(LCMSMS)测定血浆中的总同型半胱氨酸.docVIP

使用液相色谱法联合串联质谱法（LC/MS/MS）测定血浆中的总同型半胱氨酸 （一）标本 以含有EDTA的真空採血采器採血4.5mL（BD Vacutainer Systems），将血液收集管立即放置在冰上，在3500×下离心5分钟。分离血浆，在-20℃下保存直至分析时。 （二）试剂 1、Recipe-GmbH的同型半胱氨酸试剂盒（Sandstra?e 37–39，D-80335 Munich/Germany）该试剂盒包含以下成分： （1） 内标液，5mg d8-同型半胱氨酸溶于1mL去离子水，浓度最终为5?g/mL。 （2）同型半胱氨酸校准物质：加入3mL去离子水，轻轻混合，静置15分钟使其完全溶解。复溶后，在-20℃下保存校准液，一周后丢弃。 （3）两个水平的质控物质：加入3mL去离子水，轻轻混合，静置15分钟使其完全溶解。复溶后，在-20℃下保存校准液，一周后丢弃。 2、还原剂，1,4-二硫苏糖醇（DTT）：在冰箱中防潮储存。将77mg 1,4-二硫苏糖醇溶解至1mL去离子水中。每天新鲜制备（见注释2）。 3、沉淀剂：在通风柜中制备，将25?L液相色谱级三氟乙酸和50?L液相色谱级甲酸加入50mL色谱级乙腈中。充分混合。可稳定一周。 4、流动相A，高效液相色谱级水含有0.1%甲酸（ v/v）：混合1mL甲酸至999mL的水中，每周制备新鲜的。 5、流动相B，高效液相色谱级乙腈含