实验三、细胞电泳.ppt

实验三 细胞电泳 盛军庆 南昌大学生命科学与食品工程学院 实验三 细胞电泳 实验原理：在外界附加电场作用下产生多相系统相位移效应，称为电动现象，属于此种电动现象的包括电泳和电渗透。 在电场作用下，液体介质中的悬浮质点与介质间的相对运动，称为电泳。将细胞制成悬浮溶液，使其单个游离的细胞分散于等渗的介质中，在电场作用下，细胞在电泳室内发生运动。这种现象称为细胞电泳。 实验目的：细胞表面具有一定的电荷（通常为负电荷），其表面吸附了一层极薄的水膜，它与介质间存在着电位差，此电位差称为ξ电位。 每种细胞在恒定的条件下（如温度、电压、电流、介质浓度、pH值等），其电泳速度和ξ电位十分稳定，但在各种有害因子、病理状态的影响下，可降低其表面电荷，所以细胞电泳速度和ξ电位值发生改变（降低）。因此，利用细胞电泳研究生命结构的表面性质，鉴定细胞或单细胞有机体的机能和病理状态具有重要的意义。 静止层： 早已发现，在外加电场的作用下，处在两端封闭的毛细管中不同深度的各层微粒的泳动速度是不同的。这是因为微粒受到电泳和电渗两种因素作用的结果。 单纯的电泳通常使各层微粒以同一速度移向正极，电渗的情况却比较复杂。在外加电场的作用下，沿管壁的一层，以较高的速度流向负极，越是远离管壁，液层的流速越低。管的两端是封闭的，管内的液体流动总量为零。因此，在同一时间内，有多少液体沿管壁附近流向负极，就必然有同量液体流向正极。流速是逐层变化的，在两种流向之间，存在流速为零的一层，即为静止层。 处在静止层上的微粒，其移动速率才等于电泳率。在静止层附近，深度—速度曲线的陡度很大，深度的微小偏离，将引起测定速度的较大误差。因此，准确地确定静止层，是显微电泳中一项最精细、最重要的工作。 断面长方形显微观察电泳槽的静止层在距显微观察电泳槽前壁的0.202D和0.798D处（可根据上面介绍的方法求得）。 细胞电泳的应用：可用于观察红细胞和血小板。由于红细胞和血小板表面电荷是决定红细胞集聚倾向和血液凝固性的主要因素，而这两者又是血液粘度的重要成因，因此，测量和纠正红细胞和血小板的集聚倾向，在血瘀症研究和治疗中具有理论意义和实用价值。此外，细胞免疫学、药物药理学等等的研究中也有使用显微电泳技术的报导。 实验用品 一、器材： SD-2型细胞电泳仪1台、光学显微镜1台、、细胞电泳架1个、5ml注射器1支。 二、试剂： 氯化钠、蔗糖、肝素。 实验： 玻璃小室外形 玻璃小室的构造： 玻璃小室内部容积为：40×18×0.8mm, 约0.58ml 玻璃小室由上下两块0.8mm的薄玻璃组合而成，上下两块玻璃内壁分别刻有不同方向的永久性条状标记线。玻璃小室外部有指示标签，按照标签即可在显微镜下寻找到内层上下的永久性标记。 玻璃小室的内层空间仅有0.8mm的高度，两端是开放的。在操作过程中应注意轻拿轻放，按压玻璃小室时应用手按压两边，而不要压在中间。两端留有一段可见的部分是为了观察液体及是否存留气泡。原则上加样时应加满，不能留有气泡。 玻璃小室的长度比固定架的电极块间距略长一些，为的是能紧密接触导电橡胶电极。 当玻璃小室被固定在两个导电橡胶电极块之间后，它两端就和电源连通，其两端所加的电场就会对玻璃小室内部的液体直接施加影响。其电极之间的距离就是玻璃小室的长度40mm。 玻璃小室与固定架左右都没有方向性，可以对调。 7．固定与加样： 安放玻璃小室时应先将其一端对准一侧的胶块中间，用适当的力推压，将另一端的4/5留在胶块里，1/5露出在外，见图八、图九。然后用注射器针头插入玻璃小室的内部加样，见图十、图十一。 图九 加样前玻璃小室的摆放 图十 加样时注射器的摆放 图十一 加样时不应有液体渗漏，加样完毕不应有气泡存留 图十二 加样完毕将玻璃小室按平，插上电极。 图十三 取下玻璃小室的方法 取下玻璃小室时不可直接向上用力，应该向外侧缓缓推出，见图十三。 图十四 显微观察电泳槽固定架 五、实验结果：