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儿童川崎病急性期淋巴细胞亚群变化和意义 　　【摘要】 目的：观察川崎病儿童急性期外周血淋巴细胞亚群的变化，以探讨儿童川崎病的发病机制。方法：选择在本院最终确诊为川崎病的219例患儿作回顾性分析，106例健康体检儿童作为对照组，应用流式细胞术检测川崎病患儿治疗前及健康对照组儿童外周血淋巴细胞亚群CD3+细胞、CD3+ CD4+细胞、CD3+CD8+细胞 、CD16+ CD56+细胞、CD19+细胞的百分率以及CD4+/CD8+的比值。结果：与健康对照组相比，川崎病患儿外周血CD19+细胞的百分率、CD4+/CD8+比值均明显升高（P0.05），家长均知情同意。 1.2 检测方法 取清晨空腹静脉血2 mL，用乙二胺四乙酸（EDTA）钾盐抗凝，各取100 μL，分别加CD3-化青素（Cy5）、CD4-异硫氰酸荧光素（FITC）、CD8-藻红蛋白（PE）、CDl9-APC、CDl6CD56-藻红蛋白荧光抗体各15 μL，对照管加同型荧光标记的鼠抗人IgG，放置室温避光孵育15～20 min，加溶血素500μL溶血10 min，用0.01 mol/L、pH 7.4的PBS洗涤（1500 r/min， 5 min）2次后，应用美国Beckman Coulter公司Epics XL-MCL型流式细胞仪进行测定。 1.3 统计学处理 应用SPSS 19.0统计软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用2个独立样本的t检验，率的比较采用 字2检验，P 　　CD4+与CD8+细胞的平衡在维持免疫稳态中起着重要作用，CD4+细胞可以促进免疫反应，而CD8+细胞则可抑制免疫反应。一般情况下，CD4+/CD8+比值维持一定的动态平衡，保持机体免疫功能稳定，如果CD4+/CD8+比值发生改变，则引起免疫功能的紊乱。本研究结果显示川崎病患儿在急性期CD4+/CD8+比值明显增高，提示这可能导致机体的免疫调节失衡，从而导致免疫损伤，参与川崎病的发病。 在本研究中，笔者发现川崎病急性期CD8+细胞也明显减少，提示CD8+细胞也参与川崎病的发病，CD8+细胞作为具有免疫抑制效应的细胞，其减少可导致免疫的过度激活，同时也导致CD4+/CD8+比值升高，加剧免疫调节的失衡，从而参与川崎病的免疫损伤，另外，尚有研究发现在川崎病患者血管壁中有CD8+细胞浸润，这或是川崎病患儿外周血CD8+细胞下降的一个重要原因[8]。 CDl6+CD56+是NK细胞的标志物，NK细胞具有一定的免疫调节功能，有研究发现川崎病患儿急性期NK细胞的百分率及绝对值均降低[5]。本研究结果也显示川崎病患儿外周血中NK细胞百分率较健康对照组明显降低，提示NK细胞也参与了川崎病的发病，NK细胞的降低可能导致对B细胞增殖和分化的抑制减弱，从而引起B细胞过度增殖。当然，NK细胞的下降可能与其浸润至炎症部位也有一定关系[5]。新近的一项研究表明在川崎病急性期，外周血CDl6+CD56+及CD8+细胞均明显下降，且这些细胞表面表达的NKG2D也明显下降，NKG2D是在一种C型凝集素样Ⅱ型跨膜糖蛋白，在生理状态下，其可以通过增强CD16+CD56+及CD8+细胞的杀伤作用来调节免疫，NKG2D在川崎病患儿急性期的低表达可能会导致免疫的失衡，从而参与发病[9]。 既往的观点以及目前也有部分研究显示川崎病患儿CD4+细胞增高，大多被解释为其可以导致免疫细胞的大量活化等，并被认为是川崎病患儿免疫异常的起始与基础环节[10-11]。但在本研究中，笔者并未发现川崎病患儿急性期CD4+细胞百分率增高，且本文研究样本含量并不小，此点值得注意，分析认为在川崎病的发病中，相较于CD4+细胞的变化，CD19+细胞的升高、CD8+细胞的低下以及进而导致的CD4+/CD8+比值的升高可能更是主要因素。 川崎病目前的诊断标准是以临床症状与体征为主，并无特异性的实验室检查，临床工作中，血常规、C反应蛋白、血沉以及超声心动图可以为诊断川崎病提供一定的帮助。但川崎病的好发年龄本身就是感染高发的年龄段，血常规异常、C反应蛋白增高很常见，尤其是尚有较多的不完全川崎病，而且即便是典型的川崎病，很多临床症状与体征也并不是同时出现，且一些症状与体征只是一过性的，这就给有些川崎病的诊断带来一定困难。本文研究发现川崎病患儿存在显著的免疫学异常，尤其是CD19+细胞，不仅升高非常明显，而且在与健康对照组的比较中，当以本院正常参考值为临界值时，发现川崎病患儿较健康对照组CD19+升高的比例明显为高。因此在临床工作中对发热的患儿，如果疑及川崎病但尚不能完全符合典型川崎病的诊断标准时，一旦发现其存有CD19+细胞的显著增高等淋巴细胞亚群的异常，即获得免疫学角度的实验室证据支持时，结合血常规及C反应蛋白