生物技术 细胞工程基础.pptVIP

cell engineering 在细胞水平上研究、开发、利用各类细胞的工程，亦即人们根据科学设计改变细胞的遗传基础，并通过无菌操作，大量培养细胞、组织乃至完整个体的技术。 主要工作领域： 动植物细胞和组织培养 体细胞融合（杂交） 细胞悬浮培养及次生代谢机理 细胞拆合与克隆 细胞核移植(nuclear transplantation) 利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 体细胞克隆羊 ——多莉 胚胎工程(embryonic engineering) 以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作，主要技术包括体外受精、胚胎切割、胚胎移植等。 干细胞与组织工程 干细胞（stem cell）是动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。胚胎干细胞来自囊胚期的细胞团，属于全能干细胞，每个细胞可以发育成为完整的个体。组织干细胞存在于成体组织中，属单能或多能干细胞，可以定向分化为一种或几种不同的组织。 组织工程是在干细胞的基础上发展起来的，将干细胞与材料科学相结合，将自体或异体的干细胞经体外扩增后种植在预先构建好的聚合物骨架上，在适宜的生长条件下干细胞沿聚合物骨架迁移、铺展、生长和分化，最终发育具有特定形态及功能的工程组织。 1.分化〔differentiation〕：细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而形成各类组织和器官。 继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织、芽）。 生根培养：将芽苗转接到生根培养基上培养成为完整植株的过程。 初代培养 继代培养 生根培养 驯化移栽 植物组织培养一般过程 思考：各种组织培养类型有何主要的异同处？ ★相同点：无菌操作 　　　　　人工培养基上培养 ★不同点：外植体不同 　　　　　成苗途径与培养方法不同 三、植物组织培养的特点 1、培养材料经济 2、培养条件人为控制，周年生产 3、生长周期短，繁殖率高 4、管理方便，有利于实现工厂化生产和自动化控制 （二）植物组织培养的基本理论 1.细胞全能性理论 2.植物的再生性 3.根芽激素理论 4.组培苗的遗传稳定性 1 细胞全能性理论 植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。 ②创造理想的适于细胞生长和分化的环境 植物细胞全能性表达的条件 ①体细胞与完整植株分离，脱离完整植株的控制 细胞全能性的实现与利用 ①直接分生芽 ②形成愈伤组织，再分化形成芽 ③形成胚状体，由胚状体直接重建完整植株，或制成人工种子后再重建植株。 实现细胞全能性的途径：34 2 植物的再生性 ◇现象：伤口愈合 扦插生根 ◇植株再生的过程即为植物细胞全能性表达的过程，经过脱分化和再分化两个阶段。 组织 分裂 分化 细胞 　分裂 已分化组织细胞 脱分化 分裂 再分化 器官 植株 录像 2.脱分化〔dedifferentiation〕:已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。 3.再分化〔redifferentiation〕:脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。 二 细胞培养的基本技术——无菌操作 细胞工程的所有试验都要求在无菌条件下进行，要求十分严格的无菌操作。 1、准备室、接种室、培养室（紫外线、熏蒸等）； 2、超净工作台、高压灭菌设备、过滤器； 3、生物材料的消毒（酒精、升汞、次氯酸钠等）； 4、试验器械、器皿的灭菌（干热、湿热）； 5、药品、培养基的灭菌（湿热、过滤）； ——细胞培养技术 细胞培养是指动物、植物或微生物细胞在体外无菌条件下的保存和生长。(微生物培养、植物细胞培养、动物细胞培养) 基本步骤包括： 获取原材料及除菌； 配制培养基，对培养基进行灭菌； 接种、培养和传代。 ——细胞融合技术 离体条件下将不同生物或同种生物不同类型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。 ——单克隆抗体 细胞融合技术的主要过程： 制备原生质体（植物）； 诱导细胞融合（化学融合剂介导、电融合、病毒融合剂介导等）； 筛选杂合细胞。 植物细胞工程 植物组织培养 细胞培养 体细胞胚发生 单倍体培养 合子胚培养 原生质体培养与细胞融合 快速繁殖技术 植物脱毒技术 次生物质与植物细胞的大量培养 人工种子 思考： 植物有哪些繁殖方法？ 分株繁殖 压条繁殖 播种繁殖 嫁接繁殖 扦插繁殖 组织培养繁殖 第一节 植物组织培养(tissue culture)技术 一、植物组织培养