细胞透性化技术和其应用.pdf

《生命的化学》2008年28卷4期 ●技术与方法 ·481· CHEMISTRYOFLIFE 2008，28(4) 文章编号：1000—1336(2008)04—0481．04 细胞透性化技术及其应用 周帅 王凤山 (山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，济南250012) 摘要：细胞透性化技术可以在不破坏细胞整体有机体系的情况下改变细胞膜的通透性，从而克服细胞膜的渗透屏 障，降低胞外物质的传质阻力，使胞内酶在稳定的细胞内环境中发挥作用，从而提高其稳定性和催化效率。细胞 透性化技术方法简便，在提高固定化细胞生物转化效率以及胞内酶的原位分析等方面有着广瑟的应用。本文将简 要介绍细胞透性化技术的概念、处理方法及其应用情况。 关键词：细胞透性化技术；透性化细胞；细胞通透性；生物转化 中图分类号：Q939．97 细胞膜保护着原生质免受外界环境的干扰，为 细胞膜的脂质反应，破坏其结构和流动性，使其失 细胞的代谢提供了良好的条件。同时，由于其选择 去原有的对胞内外物质传递的调控能力。由于不同 透过性，细胞膜在细胞与其周围介质的物质交换方 来源的细胞膜化学组成和复杂性不同，化学法对不 ell 面发挥着重要的作用。细胞透性化技术(c 同细胞透化效果的规律性较差，但该方法较容易放 permeabilization)是指在不造成细胞裂解以及不破坏细大和应用于工业生产。 胞内部有机结构的情况下改变细胞壁和细胞膜的通 化学法主要包括有机溶剂法、去垢剂法以及螯 透性，使得小分子物质和一些较大分子物质能够自 合荆法等。有机溶剂法常用的试剂主要有甲苯、乙 由地进出细胞的技术。细胞经过透性化处理后在提 醇、氯仿、丙酮等；去垢剂法主要用洋地黄皂苷、溴 高通透性的同时，整体结构保持完整，对胞内酶仍 化十六烷基三甲基铵(CTAB)等；螯合剂法主要用乙 具有相当的保护作用，可保证胞内酶催化作用的充 二铵四乙酸(EDTA)等。透性化处理操作时，通常是 分发挥，并延长酶的使用寿命。细胞透性化技术在 选取一种或几种不用的试荆、在不同的作用条件下 提高固定化细胞生物转化效率、胞内酶的原位分析 (浓度、温度、反应时间等)对细胞进行处理，比较不 以及胞内物质的分离提取等方面有着广泛的应用。 同试剂的处理效果，选用最佳方法。 de 1．细胞透性化技术 Le6n等f11使用己烷、苯酚、甲苯、乙醚、氯 根据使用的渗透剂或方法的不同，细胞透性化 仿、乙醇、甲醇等共lO种有机溶剂透性化处理带有 技术主要包括化学法、物理法和生物法。在具体的 研究和应用中，应根据具体情况和应用选择合适的 相同的处理条件下，不同试剂处理后得到的透性化 方法。 大肠杆菌的PGA酶活相差较大，由300．8％到29．4％ 1．1化学法 化学法的机理是渗透剂透过细胞壁后与 不等，使用乙醇及甲醇处理后甚至未检测到酶活， 表明不同的有机试剂对某一特定细胞的处理效果不 尽相同，因而增加了透性化处理的不确定性和盲目 性。 收稿日期：2008