石蜡包埋组织切片miRNA提取.PDF

石蜡包埋组织切片miRNA提取 试剂盒(DP502) 操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. 石蜡切片或石蜡块样本 2. 无水乙醇，二甲苯 3. 移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ，1 ml）；1.5 ml，2.0 ml 离心管 （RNase-free ） 4. 涡旋振荡器，台式低温离心机，金属浴/水浴 实验准备-试剂盒准备 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无 水乙醇，加入量请参见瓶上标签。在 加入无水乙醇后在瓶身做好标记。 Step 1 使用石蜡切片样本时，取切片 （5-10 μm 使用石蜡块样本时，将石蜡样品切成 2 厚，1×1 cm 大小）2-8张，刮取样本。 5-10 μm厚的片状，切2-8片。 注意：使用石蜡块样本时，如果样 品表面暴露于空气中, 最初的2~3片 弃掉不用。 Step 2 迅速将切片或刮取的样本置于1.5 ml RNase-free的离心管中，加入1 ml二甲 苯，剧烈涡旋10 sec。 Step 3 12,000 rpm （~13,400 ×g ）室温离心2 min ， 弃上清。 注意：建议用移液枪吸除上清，不要吸到沉 淀；不要用倾倒去除上清。 Step 4 在上述管中加入1 ml无水乙醇，涡旋混匀10 sec。 Step 5 室温(15-25℃)，12000 rpm (~13,400×g) 离心2 min 。 用枪头吸除上清，小心不要吸到沉淀 用一个新的枪头小心吸出残余的乙醇。 Step 6 打开管盖，室温(15-25℃)或37℃放置10 min直至残余的乙醇挥发完全。 残余的乙醇会对RNA产生影响。 Step 7 加入150 μl裂解液RF以及10 μl Proteinase K于沉淀中，彻底涡旋混匀。 Step 8 55℃孵育15 min之后80℃孵育15 min。 Step 9 冰上放置3 min ，12,000 rpm (~13,400×g)离心15 min，转移上清至新的2 ml RNase-Free离心管中。 Step 10 加入16 μl的RDD 颠倒混匀 室温放置15 min 和10 μl的DNase I Step 11 加入320 μl缓冲液RB 涡旋混匀 Step 12 加入1120 μl的无水乙醇