单子叶植物rna干扰和过表达gateway载体的构建-ingentaconnect.pdfVIP

植物遗传资源学报2013,14(1):　 -　 Journal of Plant Genetic Resources 单子叶植物 RNA干扰和过表达 Gateway载体的构建 1,2 1,2 1 2 毕惠惠 ,王根平 ,王成社 ,夏兰琴 1 2 ( 西北农林科技大学农学院/ 旱区作物逆境生物学国家重点实验室,杨凌712100; 中国农业科学院作物科学研究所,北京 100081) 　 　 摘要:基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。 载体的发展和改良是提高植物遗 传转化效率的重要基础,RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。 Gateway 克隆技术 是一种基于lambda噬菌体特异位点重组特性的通用克隆技术,该技术可以将大批目的基因方便、快捷地连接到受体载体上。 本文利用Gateway技术结合传统酶切、连接方法,构建了适用于单子叶植物基因枪和农杆菌转化的RNA 干扰 Gateway 载体 pAHC-PSK-RNAi、pClean-G185-RNAi和过表达Gateway载体pAHC-PSK-OE和pClean-G185-OE,为利用基因枪和农杆菌介导的 遗传转化,在小麦和水稻等单子叶植物中进行规模化基因功能研究奠定了基础。 　 　 关键词:单子叶植物;遗传转化;RNA干扰;过表达;Gateway Construction of RNAi and Overexpression Vectors for Genetic Transformation of Monocotyledonous Plants Based on Gateway Technology 1,2 1,2 1 2 BI Hui-hui ,WANG Gen-ping ,WANG Cheng-she ,XIA Lan-qin 1 ( State Key Laboratory of Crop Stress Biology inAridAreas/ College of Agronomy,NorthwestAF University,Yangling 712100; 2Institute of Crop Science,ChineseAcademy of Agricultural Sciences,Beijing 100081) Abstract:Particle bombardment andAgrobacterium-mediatedtransformationsarethetwomostwidely employed methods in plant genetic transformation.Vector system plays an important role in development of an efficient trans- genic technology.Atpresent,RNAiandoverexpressionvectorsarewidelyusedforgenefunctionanalysis.Gatewayis an efficient andhighthroughputcloningtechnology,whichbasedonthesite-specificrecombinationcharacteristicsof lambda phage.Using Gatewaytechnology,largenumbersof genescanbeclonedintothedesiredvectorsquickly and conveniently.In this study,the overexpression vectors pAHC-PSK-OE and pClean-G185-