明恢系列籼粳交品系遗传多样性研究.PDF

《三明农业科技》2010年第2期（117） 明恢系列籼粳交品系遗传多样性研究 杨旺兴许旭明张受刚卓伟马彬林韦新宇邹文广范祖军杨腾帮 三明市农业科学研究所 水稻种质资源遗传多样性不仅表现在表型 盲目性，为提高水稻育种工作效率提供理论指导。 性状上的差别，也表现在DNA 水平上的差异。1 材料与方法 分子标记是检测种质资源遗传多样性的有效工 1.1 试验材料 具。本研究选用39 份不同类型的籼粳交品系 1.1.1 供试材料 和17 份籼、粳稻亲本为材料，利用表型和SSR 供试材料为福建省三明市农业科学研究所 分子标记，研究和探讨供试亲本及明恢系列籼粳 17 个籼稻、粳稻亲本和39 个不同阶段育成的 交品系的遗传多样性，以期减少籼粳品系配组的 籼粳交品系（表1）。 1.1.2 SSR 引物 1.2 试验方法 SSR 引物序列由上海生物工程技术服务有 1.2.1 农艺性状调查 限公司合成。参照已发表的分子标记遗传图 将56 份亲本和籼粳交品系于2007 年晚季, 谱，选用均匀分布于水稻全基因组12 条染色体 在沙县本所水稻试验田种植。6 月15 日播种， 上的221 对SSR 引物。 7 月15 日移栽；采取随机区组排列，3 次重复， 2 《三明农业科技》2010年第2期（117） 每区种植5 行，每行8 株，单本插植，周围设保 加ddH O 至终体积为20 L ，反应混合物用20 2 护行，插植规格为20cm×20 cm 。田间管理按常 L 矿物油覆盖，以防止反应过程中液体蒸发。 规方法统一进行。收获时每小区选取有代表性 PCR 反应在PTC-200TMPCR 仪上进行DNA 扩 的5 株进行室内考种脱粒，考查生育期、穗长、增。本实验PCR 反应所用的10×Buffer 、dNTPs、 株高、单株有效穗、每穗总粒数、每穗实粒数、结 MgCl 、Promega Taq DNA 聚合酶均由腾龙公司 2 ( ) 提供。 实率、剑叶长度与宽带、一 二 次枝梗长度与个 数、千粒重共20 个性状。所有表型性状数据平 1.2.2.4 SSR 反应程序 均值（见附表1 略），经标准化处理后，利用统计 反应程序为：94 ℃预变性5min ；94 ℃变性 软件DPS7.05，以欧式距离为标准，按类平均法 45s，55℃复性45s，72 ℃延伸60s，34 个循环；最 ( ) 后72 ℃补充延伸10min ；反应产物在4 ℃下保 UPGMA 进行聚类分析。 1.2.2 SSR 分子标记 存待用。 1.2.2.1 水稻基因组DNA 的提取 1.2.2.5 电泳检测 采用改良过的CTAB 法。采集苗期的新鲜 PCR 扩增产物加3 L 上样缓冲液，上样4 L， 水稻叶片，称取1.0g 于研钵中，加入液氮研磨 在 DYCZ-30 型电泳仪上进行非变性聚丙烯酰 成粉状，迅速转移至5ml 预热至95℃的3.0× 胺凝胶电泳后，通过银染法检测结果。凝胶成 CTAB （3% CTAB ，0.1mol/L Tris-HCl ，0.025 分包括 30%丙烯酰胺，10%过硫酸铵，0.1% mol/LEDTA ，0.5 mol/L NaCl ，2%巯基乙醇）提 TEMED ；电泳缓冲液为1×TBE，250V 电泳约 取液中，充分混匀，置65℃水浴保温30min ，期 1.5h 。在白炽灯下观察电泳结果，进行数据统计。 间不断摇匀，随后加入等体积的氯仿/异戊醇 1.2.2.6