多药耐药对肝癌细胞增殖凋亡侵袭活性耐药机制及丝裂原活化.pdfVIP

肿瘤2012 年7 月第32 卷第7 期　TUM OR Vol. 32, J uly 2012　　 507 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2012 .07.005 Copyright© 2012 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 多药耐药对肝癌细胞增殖 、凋亡、侵袭活性 、耐药机制及丝裂原活 化蛋 白激酶表达的影响 1 1 2 3 3 3 3 颜　昕，阮文雯，王效民，丁　鑫 ，郝兰香 ，廖洪锋 ，潘　超 1. 厦门大学医学院临床医学系，厦门　361003 ；2 . 厦门大学附属中山医院肝胆外科，厦门　361004 ；3. 厦门大学 附属中山医院病理科，厦门　361004 [ 摘要 ]　 目的：通过化疗药物诱导建立多株人肝癌多药耐药细胞模型，探讨多药耐药获得对细胞增殖、凋亡、侵袭 能力的影响，耐药机制及与丝裂原活化蛋白激酶 （mitogen-activated protein kinase ，MAPK ）信号通路表达的相关 性。方法 ：采用多柔比星 （adriamycin ，ADM ）高浓度冲击和小剂量缓升 2 种方法诱导建立人肝癌细胞 （HepG2 、 SMMC-772 1 和 BEL-7402 ）耐药模型。比较耐药细胞株与亲本细胞株间的差异，主要包括采用生物发光法进行 药物敏感实验并计算耐药指数；RT-PCR 法和免疫组织化学法检测相关耐药基因 （P- 糖蛋白、多药耐药相关蛋白 1、肺癌耐药蛋白、乳腺癌耐药蛋白、蛋白激酶 C、谷胱甘肽 -S - 转移酶 - π和拓扑异构酶 Ⅱ）mRNA 及相应蛋白 的表达。免疫组织化学法检测与细胞增殖活性相关的 Ki-67 和增殖细胞核抗原 （proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）的表达；FCM 法检测细胞周期、细胞凋亡率的改变；Transwell 小室法检测细胞体外侵袭能力的改变；最后， 分别采用 RT-PCR 和蛋白质印迹法检测 MAPK 信号通路中ERK 1、ERK2 、ERK 5 、J NK 1、J NK2 和p 38α 基因及 相应蛋白的表达。结果：共建立 6 株 ADM 耐药细胞株；与亲本细胞株相比，耐药细胞株耐药指数均＞ 5 ，并对多 种化疗药耐受性增强，多药耐药相关基因及蛋白的表达均上调 2 ～ 10 倍，以高浓度冲击法诱导的细胞中蛋白表达上 调明显。耐药细胞中 Ki-67 及 PCNA 蛋白的表达量均升高 20 倍以上，细胞周期被阻滞在 S 期，体外侵袭能力增强 1.3 ～ 2.5 倍；ADM 干预后，细胞凋亡率减少 60% 以上。MAPK 信号通路中不同基因和蛋白表达量均有不同比例升 高，以ERK1、ERK2 升高明显。结论：ADM 能够诱导多株人肝癌细胞产生多药耐药，导致细胞增殖活性升高、细 胞周期改变、抗凋亡能力及侵袭能力增强。MAPK 信号通路中相关蛋白表达的上调与细胞多药耐药有一定关系。 [ 关键词 ]　肝肿瘤；多药耐药相关蛋白类；丝裂原激活蛋白激酶类 [中图分类号]　R735.7 [文献标志码]　A [文章编号]　1000-7431 (2012) 07-0507-09 The effects of multidrug resistance on cell proliferation, apoptosis and invasion activity and the expression of mitogen-activated protein kinase in human hepatocellular cancer cells 1 1 2 3 3 3 3 YAN Xin , RUAN Wen-wen , WANG Xiao-min , DING Xin , HAO