狂犬试剂盒说明书-北京中海生物科技有限公司.docVIP

提纲 产品背景 原理 产品特色 产品性能指标比较 主要操作 联系我们 背景 狂犬病是由狂犬病毒的急性接触性人兽共患传染病我国是狂犬病的高发国家，居世界第二位引起政府和高度关注犬狂犬疫苗是否产生了保护性抗体，(OIE)推荐，人和动物血清中每毫升含有0.5IU抗狂犬病毒抗体，被认为是能抵抗狂犬病毒感染的最小免疫抗体量。 狂犬病抗体检测主要有三种方法：经典方法是小鼠脑内中和试验（MNT），但此法需要大量实验动物，耗时，受操作手法、动物个体差异的影响；第二种方法是荧光抗体病毒中和试验（FAVN），虽为OIE采纳，但对试验条件要求高，成本高，不适宜基层大规模筛选；ELISA方法作为FAVN方法的替代方法，一次可检测大量样品，并且操作简便，成本低，检测时间短，可用于临床犬抗体水平的快速筛选。目前，我国尚无国产兽用的狂犬病抗体检测试剂盒，北京中海科技有限公司于2005年开始研发狂犬病ELISA抗体检测试剂盒，通过5年多的研究，根据《兽用新生物制品管理办法》的要求，已完成了实验室研究、中间试制、临床试验。目前，已进入申请注册阶段。 原理 间接法是检测抗体常用的方法。其原理把抗原在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面测定时，将受检样品和酶标记物按一定程序反应形成复合物，并加入酶作用的底物反应终止时，根据定性或定量分析有色产物的量来确定待检样品中的抗体的含量。（见）。操作步骤如下：1）将特异性抗原与固相载体联结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。2）检血清血清中的特异抗体与固相抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，血清中的成份被洗去。3）加酶标抗抗体。A/过氧化物酶标记的抗抗体，固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关4）加底物显色(OD值)。 产品特色 本试剂盒采用狂犬病病毒糖蛋白包被酶标板，通过间接ELISA法检测狂犬病抗体，即可定性，亦可定量。 特异性：与犬细小病毒、犬瘟热、犬传染性肝炎、犬冠状病毒阳性血清无交叉反应，具有良好的特异性； 敏感性：最低抗体检出量0.22IU/ml； 与其他方法比较：方便、简单、快速、一次检测样品数量大； 与进口试剂盒比较：特异性高，敏感性略低，且价格便宜。 产品性能比较 在相同条件下，分别用狂犬病ELISA抗体检测试剂盒与进口试剂盒，分别按各自操作说明书检测血清背景清楚的180份血清，其中阳性血清127份，阴性血清53份，检测结果如下。 检测结果 狂犬病ELISA抗体检测试剂盒 进口试剂盒 阳性（只） 120 131 阴性（只） 60 49 假阳性（只） 0 4 假阴性（只） 7 0 敏感性（％） 95.2 100 特异性（％） 100 92.4 主要操作 1 准备 1.1 使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直。 1.2 洗涤液 将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释。 1.3 将狂犬病阳性血清和狂犬病阴性血清，0.5ml，静置1.4 血清的样品用血清稀释液1∶100稀释1μl样品加入99μl血清稀释液中 2 样品检测 2.1 将血清样品加入酶标板，100μl/孔，37℃作用40分钟； 2.2 洗涤5次，加入酶结合物，100μl/孔，37℃作用40分钟； 2.3 洗涤5次，加入底物显色液，100μl/孔，37℃避光显色15分钟； 2.4 终止 加入终止液，50μl/孔。 2.5 测量 450、620nm各孔OD值。