产丁二酸运动发酵单胞菌的构建和发酵性能-应用与环境生物学报.pdfVIP

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2017-11-03 发布于天津
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产丁二酸运动发酵单胞菌的构建和发酵性能-应用与环境生物学报.pdf

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2015-08-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2015.02008 / Chin J Appl Environ Biol 2015 21 ( 4 ) : 657-664 应用与环境生物学报，产丁二酸运动发酵单胞菌的构建和发酵性能* 1 1 1 1 1 1, 2** 税宗霞王景丽秦晗吴波谭芙蓉何明雄 1农业部沼气科学研究所，生物质能技术研究中心成都 610041 2农业部农村可再生能源开发与利用重点实验室成都 610041 摘要丁二酸是一种重要的有机化工原料及中间体，微生物发酵法产丁二酸具有十分显著的经济和环境优势，但目前研究中的产丁二酸野生菌或工程菌发酵副产物较多，且大多数发酵过程中需严格厌氧，限制了在丁二酸工业化生产中的应用. 本研究以运动发酵单胞菌（Zymomonas mobilis ZM4 ）为出发菌株，利用同源重组原理分别敲除其ED代 2 pdc ZMO1360 adhB ZMO1596 谢途径个关键酶基因——丙酮酸脱羧酶基因（，）和乙醇脱氢酶基因（，），以期获得能产丁二酸的重组工程菌株. 通过同源重组成功获得敲除丙酮酸脱羧酶基因及乙醇脱氢酶基因的2株突变菌株，分别命 ZM1360 ZM1596 23 g/L 30 h ZM1360 ZM1596 名为和 . 发酵试验结果显示：在葡萄糖的培养基发酵，和丁二酸产量分别达 2.8 g/L和0.67 g/L ，乙醇产量分别下降16.7%和2.33% ；而出发菌株Z. mobilis ZM4发酵液中则未能检测到丁二酸. 与出发 Z. mobilis ZM4 ZM1360 ZM1596 PDC ADH 35.85% 菌株相比，和中丙酮酸脱羧酶（）和乙醇脱氢酶（）酶活也分别下降和 69.51% pdc 82% adhB Z. mobilis ；相应地，基因表达下降了，基本无基因表达. 本研究表明，通过阻断乙醇合成代谢途径，有利于丁二酸的积累，为构建新型高效的产丁二酸基因工程菌株奠定了一定基础. 图7 表2 参30 ED 关键词丁二酸；运动发酵单胞菌；代谢途径；丙酮酸脱羧酶；乙醇脱氢酶；基因敲除 CLC Q78 : TQ921 Construction and preliminary fermentation of succinate-producin