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生化科技研究所微生物 與細胞專題討論 題目 ：High-Level Rapid Production of Full-Size Monoclonal Antibodies in Plants by a Single-Vector DNA Replicon System 作者 ： Zhong Huang, Waranyoo Phoolcharoen, Huafang Lai, Khanrat Piensook, Guy Cardineau, Larry Zeitlin, Kevin J. Whaley, Charles J. Arntzen, Hugh S. Mason and Qiang Chen 文章來源：Biotechnology and Bioengineering 106: 9-17, 2010. 演講人 ：Hao-Ye Lin 林浩業 R99B22024 指導老師 ：Ching-Tsan Huang, PhD 黃慶璨 博士 演講日期 ：December 20, 2010 演講地點 ：The 6th Classroom 摘要 轉基因 植物(transgenic plants)表現醫藥用蛋白質 (plant-made pharmaceuticals) 具備安全性高 、製程簡單和成本低廉的優勢，但也有產量低和難以同時 表現多個 次單元體蛋白質的缺點。為了克服此問題 ，本研究嘗試以雙生病毒屬豆科黃矮病 毒衍生載體(Bean yellow dwarf virus-derived vector)和病毒複製起始蛋白質 Rep/RepA ，在菸草葉中共同表現具兩個次單元體的伊波拉病毒外套膜醣蛋白單 株抗體(monoclonal antibody) 。此抗體經實驗證實可以和減毒後的伊波拉病毒專 一性的結合，顯示其功能正確 。此外，共表現病毒複製起始蛋白Rep/RepA會促 進異源蛋白質快速大量產生 ，產量可達0.5 mg/g leaf fresh weight ，約在四天內便 可偵測到相當高量的單株抗體 。本篇研究亦比較多種載體組合對產量的影響，結 果顯示 將多個基因建構於單一載體的形式即可表現相當高的產量可進一步簡化， 生產製程，建立以植物生產多次單元體藥用蛋白質的良好 表現平台。 Keywords: monoclonal antibody; transgenic plants; plant-made pharmaceuticals; viral vector 前言  本研究之重要性 利用轉基因植物生產醫藥用蛋白質具有安全性高 、成本低廉和產物功能完 整的優點 ，例如酵素: 、營養素 、抗體 、疫苗等 。其中單株抗體 不僅可以應用 在人類或動物的醫療 ，也已廣泛地應用於 工業、農牧業等不同領域上 ，是目前 以植物生產藥用蛋白質研究最 接近上市階段的開發標的 。本篇研究以豆科黃矮 病毒衍生載體建立一個大量、快速生產多次單元體蛋白質的表現平台 。除了應 用在單株抗體上 ，也可提升生產具多個次單元體的藥用蛋白質 ，例如口服疫 苗 ，為醫藥產業現階段和未來發展的重點 。  前人作過的研究 1989 年科學家首度證實可在轉基因植物中生產功能性抗體 【4 】，隨後許 多以植物生產異源蛋白質表現平台的研究相繼投入開發 。前人研究利用單一病 毒載體或是兩種不同的重組病毒載體在菸草葉中生產單株抗體 【3】。進一步研 究顯示利用雙生病毒的複製起始蛋白質 ，建構可提升異源基因表現量的載體系 統 ，以促進轉基因植物的異源蛋白質 產量 【1】。  作者為何要作本研究 作者先前以豆科黃矮病毒衍生載體 配合， 雙生病毒的複製起始蛋白質以農 桿菌轉形策略 ，應用於菸草的基因轉殖 ，可以快速大量地表現 B型肝炎表面 抗原等相關異源蛋白質 【2 】。由於目前在植物中缺乏可同時 表現多次單元體蛋 白質的平台 ，因此作者嘗試以先前的載體 ，建構具有多個次單元體的病毒載 體 ，希望可以建立一個可生產多次單元體蛋白質的 平台。  本研究欲完成之項目