棉铃虫细胞色素p450337b3cyp337b3的表达-应用昆虫学报.pdfVIP

应用昆虫学报ChineseJournal ofAppliedEntomology 2014,51(6): 15451552. DOI: 10.7679/j.issn.20951353.2014.180 棉铃虫细胞色素P450337B3 （CYP337B3）的 表达、纯化及结晶* 王璐璐1,2** 王静敏2,3 傅 晟2*** 汪 颖2*** （1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300222；2. 天津国际生物医药联合研究院，天津 300457；3. 南开大学，天津 300071） 摘 要 【目的】以抗性棉铃虫Helicoverpa armigera体内发现的一种基因重组导致的嵌合型P450 酶 作为研究对象，通过基因克隆、体外重组表达、蛋白质结晶等技术手段，获得 （ ） CYP337B3 CYP337B3 △23 的晶体结构，为深入了解棉铃虫P450酶CYP337B3 的结构与功能奠定基础。【方法】 对CYP337B3编码 基因进行了密码子优化，通过基因重组，将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达尝试，通过亲 TM 和层析及RESOURCE Q离子交换层析对CYP337B3 （ 23）进行体外纯化，利用气相悬滴结晶方法对 △ （ ）进行结晶条件的筛选及 射线晶体衍射。 通过密码子优化，实现了 CYP337B3 △23 X 【结果】 CYP337B3 （△23）在大肠杆菌原核表达系统内的大量表达，经过体外纯化及十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 检测， （ ）蛋白纯度可达到 左右，我们对 （ ）进行了蛋白结晶条件的 CYP337B3 △23 95% CYP337B3 △23 筛选，最终获得了CYP337B3 （ 23）的结晶条件和蛋白晶体。 本文利用气相悬滴结晶方法获得 △ 【结论】 了CYP337B3 （ 23）的蛋白晶体，为今后CYP337B3 的三维结构解析、功能研究以及最终阐述该种新型 △ 的棉铃虫抗药机制奠定了良好的基础。 关键词 棉铃虫，CYP337B3，蛋白质晶体学 Expression,purificationandcrystallizationof HelicoverpaarmigeraCYP337B3 WANGLu-Lu1,2** WANGJing-Min2,3 FU Sheng2*** WANGYing2*** (1.CollegeofBiotechnology,TianjinUniversity ofScienceandTechnology,Tianjin300222;2.TianjinInternationalJointAcademy ofBiotechnology andMedicine,Tianjin300457,China;3.NanKaiUniversity,Tianjin300071,China) Abstract [Objectives] CYP337B3 is aunique P450 enzymethat arose