红花查耳酮异构酶基因植物表达载体的构建及拟南芥转化.pdfVIP

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 18 期 2016 年 9 月 • 3279 • 红花查耳酮异构酶基因植物表达载体的构建及拟南芥转化 1, 2 2 1 1 1, 2 1 1 3* 1, 2* 刘秀明 ，李晓璇 ，姚 娜 ，王立勇 ，李晓薇 ，董园园 ，王 南 ，孟璐璐 ，李海燕 1. 吉林农业大学 生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，吉林 长春 130118 2. 吉林农业大学生命科学学院，吉林 长春 130118 3. 吉林省科学技术厅，吉林 长春 130118 摘 要：目的 构建红花查耳酮异构酶（CHI ）基因的植物表达载体并在拟南芥中进行超表达验证该基因的功能。方法 将 已经分离的红花CHI 基因作为目的基因，在其两端引入 BamH I 和 EcoR I 酶切位点，构建含有 35S 启动子的植物超表达载 体 pBASTA-CHI ，通过Flora-dip 法将其转化到拟南芥中，并对转基因拟南芥 T2 代植株进行 PCR 和总黄酮量检测。结果 转 基因拟南芥 T2 代植株的 PCR 检测，红花 CHI 基因已经初步整合到拟南芥基因组中，黄酮量检测表明，转红花 CHI 基因的 拟南芥比野生型拟南芥中的黄酮量有所提高，最高提高到 2.3 倍。结论 成功构建了含有红花 CHI 基因的植物表达载体，并 在拟南芥中进行超表达，获得了转基因拟南芥 T2 植株。 关键词：红花；查耳酮异构酶；黄酮；拟南芥；PCR 中图分类号：R282.12 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)18 - 3279 - 05 DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.18.023 Construction of CHI gene expression vector of safflower and its transformation in Arabidopsis thaliana 1, 2 2 1 1 1, 2 1 LIU Xiu-ming , LI Xiao-xuan , YAO Na , WANG Li-yong , LI Xiao-wei , DONG Yuan-yuan , 1 3 1, 2 WANG Nan , MENG Lu-lu , LI Hai-yan 1. Engineering Research Center of Bioreactor and Pharmaceutical Development, Ministry of Education, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China 2. College of Life Sciences, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China 3 Science and Technology Department of Jilin Province, Changchun 130118, China Abstract: Objective Plant expression vector of chalcone isomerase in safflower was built and its function was verified by over- expression of CHI in Arabidopsis thaliana . Methods CHI isolated from safflower in our previous study was introduced by BamH I and EcoR I restriction sites and constructed into the over-expression vector pB