人参皂苷Rg1对人白血病TF-1细胞EPOR信号通路的影响-tumor.PDF

肿瘤2014 年2 月第34 卷第2 期　TUM OR Vol. 34, February 2014　　 113 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2014.02 .003 Copyright© 2014 by TUM OR Basic Research 基础研究 · 人参皂苷Rg 1对人白血病TF-1细胞EPOR信号通路的影响 1 1 2 1 1 1 1 1 1 夏　菁 ，李　静 ，左国伟 ，赵　亮，魏　强 ，游智梅 ，李丹阳，刘泽洪 ，陈地龙 1. 重庆医科大学组织学与胚胎学教研室，干细胞与组织工程研究室，重庆　400016 ；2 . 重庆医科大学临床检验诊 断学省部共建教育部重点实验室，重庆　400016 [摘要]　目的：探讨人参皂苷Rg1 诱导急性髓系白血病M6 型人红白血病TF-1 细胞凋亡及其对红细胞生成素受体 （erythropoietin receptor ，EPOR ）通路的影响，以及可能的机制。方法：不同浓度人参皂苷Rg1 处理TF-1 细胞后， 应用CCK-8 （cell counting kit-8 ）法检测细胞的增殖活性，FCM 法检测并在透射电子显微镜下观察人参皂苷Rg1 诱 导TF-1 细胞的凋亡，FCM 法和免疫荧光法检测TF-1 细胞中EPOR 蛋白的表达水平和分布情况，实时荧光定量-PCR 法检测TF-1 细胞EPOR mRNA 的表达，蛋白质印迹法检测人参皂苷Rg1 作用后TF-1 细胞的红细胞生成素 （erythropoietin，EPO）反应性以及TF-1 细胞中EPOR、磷酸化EPOR、酪氨酸激酶JAK2 （J anus tyrosine kinase 2 ）、磷 酸化JAK2 、信号转导和转录激活因子5 （signal transducers and activators of transcription 5，STAT5 ）、磷酸化STAT5、 Bax 、Bcl-2 和caspase-3 （激活型）蛋白的表达。结果：人参皂苷Rg1 （12.5、25、50、100 和200 μmol/L ）作用24 、 48 和72 h 后，TF-1 细胞的增殖受到抑制 （ μ P ＜0.05 ）。人参皂苷Rg1 （12.5、25 和50 mol/L ）作用48 h 后，TF-1 细胞的早期凋亡率高于人参皂苷Rg1 未处理的对照组 （P ＜0.05 ），透射电子显微镜下可见TF-1 细胞出现凋亡变化。 FCM 法和免疫荧光检测结果均显示，人参皂苷Rg1 作用后TF-1 细胞膜表面EPOR 的表达明显减少，并且TF-1 细 胞EPOR mRNA 的表达水平下调 （ P ＜0.05 ）。与对照组比较，人参皂苷Rg1 作用后TF-1 细胞EPOR 总蛋白的表 达水平无明显变化，但降低了TF-1 细胞对EPO 的反应性，磷酸化EPOR 的表达水平明显下调，Bax 和caspase-3 （激 活型）蛋白的表达水平明显上调，Bcl-2 以及EPOR 下游JAK2 、磷酸化JAK2 、STAT5 和磷酸化STAT5 的表达水平 P 均＜0.05 ）。结论：人参皂苷Rg1 可明显抑制TF-1 细胞的增殖并促进其凋亡，其促凋亡机制可能与 均明显下调 （ 降低TF-1 细胞对EPO 的反应性，下调EPOR 下游相关蛋白的表达并激活caspase-3 的表达有关。 [关键词]　白血病；细胞凋亡；受体，红细胞生成素；人参皂苷Rg1；细胞，TF-1 [中图分类号]　R733.7 [文