赤眼蜂rdna-its2克隆测序及蜂种特异引物设计-遗传.pdfVIP

17 (2) 75～ 80　　　　　中国生物防治　Ch in ese Jou rn a l of B io logica l Con tro l　　　　　　200 1 年 5 月 赤眼蜂 rD NA - ITS2 克隆测序 及蜂种特异引物设计 李正西, 沈佐锐 ( 中国农业大学昆虫学系, 北京　100094) ( ) 摘要: 通过对松毛虫赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂 IT S2 基因 内部可转录间隔区 的克隆测序, 并联 机检索 GenB ank 核酸序列库中其它相关序列, 我们利用引物设计软件 P r im er P rem ier 5. 0 设 计出蜂种的特异引物, 对赤眼蜂各个发育期, 包括卵期、幼期和成熟期进行检测, 实现了松毛虫 赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂快速、可靠的分子鉴定和检测。该技术可用于赤眼蜂的田间种群监测。 关　键　词: rDN A IT S2; 种特异引物; 分子鉴定; 松毛虫赤眼蜂; 玉米螟赤眼蜂 + ( ) 中图分类号: S476 . 3　　文献标识码: A 　　文章编号: 1005926 1 200 1 ( ) 生物防治最重要的微小卵寄生蜂赤眼蜂属 T r ichog ram m a 是世界上应用面积最广, 防 [ 1 ] 治对象最多的天敌昆虫, 目前已知该属在 140 种以上 。赤眼蜂种一级的分类依据主要是雄蜂 外生殖器, 但由于赤眼蜂属许多种类在 自然条件下仅能见到雌虫, 同时赤眼蜂个体小、形态难 辨, 而且其形态和生理特征受环境条件的影响大, 因此赤眼蜂的鉴定和扩繁耗时费力, 给赤眼 蜂的分类、繁育、种群遗传学和行为生态学研究造成了困难。 分子标记是实现分子鉴定的重要技术手段。分子标记技术已应用于昆虫近缘种、地理种群 的鉴别。国外报道了利用RA PD 技术鉴别微小寄生蜂的遗传变异性, 以及采用PCR 技术探测 寄主卵的寄生情况[2, 3 ] 。近年, 我国已在家蚕、蚊虫、棉铃虫、玉米螟和果蝇等研究中取得成绩, [4 ] 如通过线粒体DN A 酶切图谱研究物种分化 ; 利用RA PD 方法研究不同地理种群间的遗传 [ 5 ] ( ) 多态性 ; 探讨利用 IT S2 内部可转录间隔区 序列建立赤眼蜂属分子系统分类的途径等 [ 6 ] ( ) 等 。研究表明, 核糖体核糖核酸 rRN A 是真核细胞中含量最丰富的大分子, 同时 rRN A 基 因(rDN A ) 也是真核细胞中最为保守的结构基因, 其表达产物 rRN A 占细胞总RN A 含量的 85%～ 95% , 因此在检测及诊断中常以两者之一作为识别标志。但是一段 rDN A 或一段 rRN A