猪小肠上皮细胞分离培养与鉴定-动物营养学报.PDFVIP

动物营养学报２０１５，２７（５）：１４７７⁃１４８４ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１５．０５．０１８ 猪小肠上皮细胞分离培养与鉴定 詹　 康　 左晓昕　 陈银银　 贡笑笑　 占今舜　 赵国琦∗ （扬州大学动物科学与技术学院，扬州 ２２５００９） 摘　 要： 为建立功能性永生化的猪小肠上皮细胞系，并为猪肠道营养吸收与免疫调控以及仔猪 肠道疾病发病机制的研究提供细胞模型，本试验采用组织块培养法来分离纯化猪小肠上皮细 胞，并通过细胞角蛋白１８、细胞增殖曲线、核型分析来鉴定猪小肠上皮细胞。 结果表明：１）采用 组织块培养法能够成功培养猪小肠上皮细胞并稳定传１１代。 ２）本试验获得的猪小肠上皮细胞 角蛋白１８抗原鉴定为阳性，染色体核型为二倍体。 ３）倒置显微镜下观察培养至第１１代的猪小 肠上皮细胞仍然保持着上皮细胞的特征，呈现“铺路石”和上皮样形态。 培养 １１代后的猪小肠 上皮细胞间隙开始变大，规则不明显，细胞开始凋亡。 第１５代的猪小肠上皮细胞则出现大量凋 亡并从瓶底脱落，仅有很少细胞贴壁生长。 综上所述，采用组织块培养法能够获得生物学功能 稳定的猪小肠上皮细胞系并能正常传１１代，可为细胞的永生化提供试验素材。 关键词： 猪小肠上皮细胞；功能性；肠道营养与免疫；永生化 中图分类号：Ｑ８１３．１　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１５）０５⁃１４７７⁃０８ 　 　 小肠上皮细胞是动物体内最重要的消化吸收 胞的营养吸收、肠道免疫调控机制的研究和猪小 细胞，在仔猪肠道营养吸收与肠道免疫调控发挥 肠上皮细胞系永生化提供功能性的细胞素材。 － ［１ ２］ 重要作用 。 国外研究分离肠上皮细胞多采用 酶消化法，但是主要用于研究人、小鼠等，猪小肠 １　 材料与方法 上皮细胞组织块培养鲜见报道。 多位研究人员证 １．１　 材料 实，利用酶消化法获得猪回肠、空肠上皮细胞，并 　 　 刚出生的仔猪小肠组织块（无菌活体采样）。 － ［３ ８］ 转染ＳＶ４０病毒基因可获得永生化细胞 。 Ｃｏｎ⁃ ＤＭＥＭ／ Ｆ１２ 完全培养基：１０％澳洲胎牛血清 ［９］ ｔｅａｓ等 利用小肠上皮细胞为模型在体外研究表 － （ＦＢＳ）、０．２５％ Ｔｒｙｐｓｉｎ⁃ＥＤＴＡ、５ ｍＬ 胰岛素 转铁 皮生长因子（ＥＧＦ）和生长抑制因子对小肠上皮细 － － 蛋白 硒 乙醇胺溶液（均为 Ｇｉｂｃｏ 公司产品）。 胞ＤＮＡ合成的影响，结果表明这些因子能够上调 １００ Ｕ／ ｍＬ青霉素、１００ μｇ／ ｍＬ 链霉素、４ ｍｍｏｌ／ Ｌ ［１０］ 小肠上皮细胞 ＤＮＡ 的表达。 Ｃａｒｒｏｌ 等 在利用 谷氨酰胺溶液、２．８ μｍｏｌ／ Ｌ 氢化可的松、噻唑蓝 基质胶来研究小肠上皮细胞的分化功能，并发现 （ＭＴＴ）（均为 Ｓｉｇｍａ 公司产品）。 １５ ｎｇ／ ｍＬ ＥＧＦ 基质胶能够上调小肠上皮细胞基因的表达量。 国 （Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司产品）。 细胞角蛋白１８ 单克隆抗 外已经建立了一些猪小肠上