幽门螺杆菌hsparureb融合基因在乳酸菌中的表达-中国卫生检验网.pdfVIP

·１· ·分子诊断与基因检测 · 幽门螺杆菌ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ融合基因在乳酸菌中的表达 １，２ １ １，２ １ １ ２，３ 张荣光 ，孙楠 ，段广才 ，彭晓燕 ，陈帅印 ，范清堂 １．郑州大学公共卫生学院流行病与统计学教研室，河南 郑州４５０００１；２．河南省分子诊断与医学检验技术 协同创新中心（新乡医学院），河南 新乡４５３０００；３．河南省分子医学重点实验室，河南 郑州４５０００１ 摘要：目的　构建融合表达幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）抗原ＵｒｅＢ与ＨｓｐＡ的乳酸乳球菌（Ｌ．ｌａｃｔｉｓ）菌株，为Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染的 疫苗和免疫诊断研究奠定基础。方法　从前期构建的ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ融合基因克隆菌株Ｅ．ｃｏｌｉＴＢ１／ｐＭＡＬ－ｃ２ｘ－ｈｓｐＡ－ ｕｒｅＢ中提取质粒，用ＰＣＲ方法从质粒中扩增ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ基因，将扩增产物经限制性酶切后与表达载体ｐＮＺ８１１０连接， 用于转化Ｅ．ｃｏｌｉＭＣ１０６１菌株，从转化子中提取重组质粒ｐＮＺ８１１０－ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ，用电穿孔法将其转入Ｌ．ｌａｃｔｉｓＮＺ３９００ 菌株中，用乳链菌素诱导ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ表达，应用ＰＡＧＥ分析表达产物。结果　ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ基因的ＰＣＲ扩增产物长度为 ２０８５ｂｐ，酶切、ＰＣＲ和测序鉴定结果均显示Ｌ．ｌａｃｔｉｓ表达系统构建正确，ＰＡＧＥ分析未能确定融合基因表达条带。结 论　首次以Ｌ．ｌａｃｔｉｓ为宿主菌成功构建Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ２种抗原的融合表达系统，研究发现对Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ口服疫苗和诊断技术发 展具有重要意义。 关键词：乳酸乳球菌；热休克蛋白；尿素酶；幽门螺杆菌；融合表达 中图分类号：Ｒ３７８．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００４－８６８５（２０１６）０７－－０４ ＦｕｓｉｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ ｇｅｎｅｓｉｎｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ＺＨＡＮＧＲｏｎｇ－ｇｕａｎｇ，ＳＵＮＮａｎ，ＤＵＡＮＧｕａｎｇ－ｃａｉ，ＰＥＮＧＸｉａｏ－ｙａｎ，ＣＨＥＮＳｈｕａｉ－ｙｉｎ，ＦＡＮＱｉｎｇ－ｔａｎｇ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙａｎｄＳｔａｔｉｓｔｉｃｓ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｈｅｎａｎ４５０００１，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｔｒａｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉＨｓｐＡａｎｄＵｒｅＢｉｎｆｕｓｉｏｎｗｉｔｈａｉｍ ｔｏｌａｙｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＨ．ｐｙｌｏｒｉｖａｃｃｉｎｅａｎｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｒｏｍｔｈｅｐｌａｓｍｉｄｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥ．ｃｏｌｉｓｔｒａｉｎＴＢ１／ｐＭＡＬ－ｃ２ｘ－ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢ， ａｎｄｔｈｅＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｌｉｇａｔｅｄｔｏｐｌａｓｍｉｄｐＮＺ８１１０ｗａｓｕｓｅｄｔｏｔｒａｎｓｆｏｒｍＥ．ｃｏｌｉＭＣ１０６１，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄ ｐＮＺ８１１０－ｈｓｐＡ－ｕｒｅＢｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓｗａｓｅｌｅｃｔｒｏｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＬ．ｌａｃｔｉｓＮＺ３９００．ＴｈｅＬ．ｌａｃｔｉｓｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ ｗｅｒｅｉｎｄｕｃｅｄｔｏｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅｈｓｐＡ－ｕｒｅＢｇｅｎｅｂｙｕｓｉｎｇｎｉｓｉｎ．ＡｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｄｕｃｅｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＰＡＧＥ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｏｆｈｓｐ