引物3d端不同碱基错配情况下实时荧光定量pcr非特异性扩增的发生.pdfVIP

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2017-11-11 发布于天津
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引物3d端不同碱基错配情况下实时荧光定量pcr非特异性扩增的发生.pdf

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※安全检测食品科学 2017, Vol.38, No.10 277 ’ 引物3 端不同碱基错配情况下实时荧光定量PCR 非特异性扩增的发生规律 * * 李金春，李家鹏，周彤，乔晓玲，许随根，戚彪，米瑞芳，曲超，许典（中国肉类食品综合研究中心，肉类加工技术北京市重点实验室，北京 100068 ）摘要： Ct 3´ 以错配反应与正常反应之间的Δ 值为指示，研究不同碱基错配类型、位置与个数条件下引物端与模板 Ct 之间非特异性扩增的发生规律，并构建Δ 值的二次多项式回归模型。结果表明，碱基错配种类、位置、个数对实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction ，RT-qPCR ）的非特异性扩增都有显著影响，并呈现出较强的规律性。碱基类型上，研究的各个位置上异型错配较易发生非特异性扩增，而同型错配则 P 0.05 3’ 1 较难发生，并且两种错配类型之间有显著性差异（＜）；错配位置上，相同条件下引物端第位碱基错配对 Ct 3’ Ct Δ 值影响最大，错配位置远离端时对Δ 值的影响逐渐减小，非特异性扩增也更容易发生；错配个数上，随着 Ct Ct R2 0.837 1 错配碱基个数的增加对Δ 值得影响程度不断增大，非特异性扩增较难发生。构建Δ 值预测模型达到， Ct RT-qPCR 根据此模型可以预测出不同位置、不同错配类型条件下Δ 值，从而可以判断非特异性扩增的发生的难易程度。关键词：肉类掺假；循环阈值；碱基错配；非特异性扩增；引物特异性 Pattern of Occurrence of Nonspeciﬁc Ampliﬁcation in Real-Time Fluorescent PCR with Different Base Pair ’ Mismatches at the Primer 3 End * * LI Jinchun, LI Jiapeng , ZHOU Ton