TMSB15A基因在肝癌中的表达及其生物信息学分析.pdfVIP

中国药物与临床2017年 1月第 17卷第 1期ChineseRemedies＆Clinics，January2017，Vo1．17，No．1 ·35 - · 基 础 研 究 · TMSB15A基因在肝癌中的表达及其生物信息学分析 魏 臻 王 锋 于世平 李 强 李晓宾 肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma．HCC)是生长在肝脏 司产品，核糖核酸酶抑制剂 (RecombinantRNaseInhibitor)、 组织的一种恶性肿瘤，其特点是发病率高，恶性程度高 ，预后 随机 引物 、dNTPMix、5xRTBuffer、RNase．freewater、DNA 差，也是女性的第六大致死性肿瘤和男性的第二大致死性肿 Ladder、实时定量聚合酶链反应 (PCR)均由宝生物工程 (大 瘤[1．2]。近几年，肝癌的发生和死亡呈逐渐上升的趋势，2012 连)有限公司提供，琼脂糖购 自于GENE公司，GoldViewerI 年全世界新发肝癌75．05万例，因肝癌死亡病例 74．55万例。 型核酸染色剂来 自Solarbi6公司，小鼠抗TMSB15A单克隆抗 且有半数发生在我国…。临床研究表明，肝癌的发生与前期慢 体购 自Abnova公司，小鼠抗 B．肌动蛋白单克隆抗体均购 自 性肝病相关，例如酒精性肝硬化、肝炎病毒感染和脂肪肝等， 于SANTACRUZ公司，山羊抗兔IgG，辣根酶标记和山羊抗小 也与摄入含有黄曲霉素的食物有关_3]，因此积极探索肝癌的 鼠IgG，辣根酶标记均来 自于北京中山金桥有限公司，2xTaq 致病机制对于预防肝癌的发生和促进肝癌患者的治疗方案 MsterMix、ECL发光液和蛋白提取试剂盒均为北京康为世纪 的完善具有重要的意义。与大部分肿瘤类似 ，肝癌的发生、发 生物科技有限公司 ，预染的蛋 白质PageRulerPrestainedPro— 展是多基因和多因素共同调控的复杂过程 ．与其中很多的癌 teinLadder购买于ThermoFisherScientific公司，引物由大连 症相关基因的异常表达密切相关_4_，例如原癌基因和抑癌基 TAKARA公司合成，其他试剂均为国产分析纯。 因。目前虽发现了大量的肝癌相关基因，但是肝癌的致病基 1．3 方法 因还有许多是 尚未发现的。TMSB15A基因是本课题组通过 1．3．1 引物的设计及合成 ：依据 NCBI中人类 TMSB15A 生物信息学预测的肝癌组织高表达基因，文献 [5]报道该基 (GeneBank收录号 ：NM_021992．2)序列设计引物，具体序列 因与前列腺癌、乳腺癌 、肺癌的发生密切相关 ，同属内胚层组 为：正义 5一AGCCAGACTIGTCGGAAGTG．3．．反义 5．AGCA- 织 的肝脏组织是否也有 TMSB15A基 因的高表达 。以及 ATGGAAGCACCCATCA．3．，合成产物442bp，实验以B．肌动 TMSB15A是否在肝癌的发生、发展中具有作用 ，都值得进一 蛋白为 内参 。具体引物序列为 ：正义 5．CTArITGGCAAC— 步研究 ．然而TMSB15A基因在肝癌中的研究报道甚少 ，因此 GAGCGG．T．3．，反义 5-GGTCIW ACGGATGTCAACG．3，引物 本研究主要集中在TMSB15A基因在肝癌组织、癌旁组织和 由TAKA—RA公司合成。 正常肝脏组织中的表达．并通过生物信息学技术预测该基因 1．3．2 总RNA提取及实时定量聚合酶链反应 (PCR)分析 ：取 在肝癌的发生、发展中的潜在作用 ，为下一步探索其在肝癌 液氮中保存的标本 50～100mg。采用液氮研磨法 ，并按照 - 中的作用和机制提供一定的实验依据。 zol试剂盒说明书提取肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织的 1 材料与方法