牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的克隆表达与鉴定.pdfVIP

牛羊传染病 能够鉴别诊断猪源BVDV和CSFV的PCR方法。 通过条件优化，本研究建立的PCR方法可扩增出O，9Kb的片段，引物所在区域为保守区，但扩增区段 为BvDvE2基因高变区．能够在实验室条件下对BVDV标准毒株进行高效和特异扩增，而对猪瘟石门株、 HCLV株、CSFV野毒株、PKl5细胞、牛睾丸细胞、牛血清不能扩增。 诊断，为进一步牛羊鹿群中BVDV的检测，特别是对猪源BVDV的分子流行病学调查奠定了基础。 参考文献略 牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的克隆表达与鉴定 王海燕’～，朱远茂1，薛飞’，童光志1，赵立平1，相文华1，韩文瑜3 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001,2．哈尔滨医科大学实验动物学部 黑龙江哈尔滨150086，3．吉林大学农学部长春130062) 扩增编码糖蛋白E的基因，并克隆至pET32a表达载体中。在大肠杆菌中进行表达，其中两个片段以可溶 形式表达，一个片段以包涵体形式表达。另外三个片段没有表达。利用pET32a表达载体氨基端6个组氪 酸标签，采用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下对两个可溶片段进行纯化。经免疫印迹试验和间 接ELISA检测证明，这两个纯化的重组蛋白均与牛传染性鼻气管炎阳性血清样品发生反应．而与牛传染性 鼻气管炎阴性血清无任何反应，显示其具有良好的抗原性和特异性。 关键词：牛传染性鼻气管炎；糖蛋白Ei克隆与表达 bovinerhinotraeheitis 牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious 疹病毒亚科(Alpha-herpesvirinae)，在生物型上属于牛疱疹病毒I型(Bovine 的一种重要的病原，可引起牛严重的呼吸道感染，结膜炎、脑炎，产奶下降．子宫炎，肠炎，传染性脓疱 性外阴．阴道炎(Infectiouspustular 病毒可潜伏三叉神经节或荐神经节造成潜伏感染或散毒，病牛可终身带毒，给本病的防制带来很人的困难。 全球范围的广泛流行，各国也采取了不同的诊断和控制手段，包括屠宰阳性感染牛，使用修饰活疫苗，灭活疫 苗，但目前主要是使用基囡缺失标记疫苗并配套鉴别诊断方法实施控制或消灭该病的根除计划。在德国主 要采用gE缺失标记疫苗并配合使用gE特异性抗体诊断试剂盒区分感染牛和免疫牛，有的国家采用gE／TK 双基因缺失标记瘦苗控制本病。 基因组大约编码70个基因．30个以上的基因对病毒在细胞培养物上的生长是非必需的，总共编码11种糖 E，gE)是IBR病毒粒子的主要成分之一，它以细胞特异的方式影响病毒从 蛋白．糖蛋白E(glycoprotein 感染细胞的释放，gE基因缺失可影响病毒的复制及在细胞间的传播。但是，gE基因对病毒复制是非必需 的。糖蛋白gE能够在病毒粒子表面及病毒感染细胞表面高水平表达，而且是中和抗体的主要作用靶位， 4株gE特异性单 因此gE是牛传染性鼻气管炎鉴别诊断的可靠标记。Lehmann等利用噬菌体展示技术并J{；I 970 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 抗鉴定了gE 脯氦酸区和N．端与模拟表位具有显著的相芙性。 我国自70年代从进口种牛中发现了本病。并已分离和鉴定了病毒。1980年从新西兰进口牛中检测到 抗体．随后在本地牛群中也查到抗体，并从广西当地牛群中分离到病毒。国内部分省区血清学普查结果表 明，北京、广东、广西、河南、河北、新疆、山东、四川等地的黑白花奶牛、本地黄牛和水牛中都有IBRV 感染，给养牛业造成一定的经济损失。杨春明应用间接血凝试验，对青海省刚察地区的牛进行了IBR血清 艮觇律和其gE基因的结构和功能研究，本研究对gE基因进行了克隆表达和鉴定，现将试验结果报告如下。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1病毒和细胞IBRBarthaNu／67株由本所保存，牛肾细咆‘MDB日4[}j电中国兽药监察乒斥。 1．1．2血清IBR阳性血清，IBR阴性血清均购白中国曾约监察所：血清样品本所保存。 1．1．3主要试剂及仪器DNA凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒及PCR产物回收试剂盒为上海华舜生物二|：