靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选.pdfVIP

第38卷第 1期 西 安 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．38No．1 2017年 1月 JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences) Jan．2O17 ◇基础研究◇ 靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选 郑 芳 ，罗思羽 ，韩 燕 ，宁启兰 ，温玉荣 (西安交通大学 ：1．医学部基础医学院，西安交通大学环境与疾病相关基因教育部 重点实验室，陕西西安 710061；2．生命科学与技术学院，陕西西安 710049) 摘要：目的 构建V-setandimmunoglobulindomaincontaining4(Vsig4)特异性纳米抗体，以期作为巨噬细胞的分子 探针 。方法 用 Vsig4重组蛋 白对羊驼进行免疫 ，分离血液 中的淋 巴细胞 ，利用噬菌体展示技术 ，构建噬菌体展示文 库 ，经过连续 3次生物淘筛获得与 Vsig4蛋白结合 的噬菌体 ，经测序和基 因比对所得 VHH序列，用 ELISA法筛选 出 抗 Vsig4的高亲和力纳米抗体，并用Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果 成功构建了插入率为 70％、库容量为 7．27×1O 的噬菌体表达文库，经过克隆筛选获得 136个 Vsig4阳性单克隆，经测序获得 15个不同的 VHH基因，将这些基因克隆至原核表达体系，表达和纯化后获得了高纯度的Vsig4纳米抗体，其 中Nbl19的亲和力 最高 ，并且可以与Vsig4稳定表达细胞系结合。结论 成功构建并筛选了特异性、高亲和力的Vsig4纳米抗体 ，以期 用于检测 巨噬细胞表面 Vsig4的表达和构建特异性分子探针 。 关键词 ：Vsig4；纳米抗体 ；噬菌体展示文库 ；生物淘筛 ；亲和力鉴定 中图分类号：R392 文献标志码 ：A DOI：10．7652／jdyxb201701002 Constructionandscreeningofnanobodytargeting macrophagemembranereceptorVsig4 ZHENG Fang ，LUO Si—yu ，HAN Yan ，NING Qi—fan ，WEN Yu—rong。 (Xi’anJiaotongUniversity：1．SchoolofBasicMedicine，HealthScienceCenter； KeyLaboratoryofEnvironmentandGenesRelatedtoDiseases，Xi’an710061； 2．SchoolofLifeScienceandTechnology，Xi’an 710049，China) ABSTRACT：Objective ToconstructV—setandimmunoglobulindomaincontaining4(Vsig4)nanobodies(Nbs) asspecificmacrophageprobessoastousethem asmolecularprobesofmacrophagocytes．Methods A nanobody phagelibrary wasgenerated by using peripheralblood lymphocytes isolated from an alpaca immunized with recombinantVsig4protein．AfterthreeroundsofselectionagainstrecombinantVsig4．TheNbsweresubjectedto sequencingandgenomealignmenttoobtainVHH sequence．NbswereisolatedandtestedforVsig4specifi