白藜芦醇对甲基乙二醛损伤BRL-3A细胞的抑制作用.pdfVIP

动物 医学进展 ，2017，38(4)：84—87 ProgressinVeterinaryMedicine 白藜芦醇对 甲基乙二醛损伤 BRL一3A细胞的抑制作用 武召珍 ，代少华 ，冯翠霞 ，李 超 ，董 强 (1．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2．错那县觉拉乡人 民政府 ，西藏错那 856700) 摘 要 ：为研究甲基 乙二醛 (MGO)对大鼠肝细胞 BRL-3A 细胞的损伤机制 ，在 MGO存在 的情况下 ，以 50 mol／L 白藜芦醇处理 BRL一3A，分别用 MTT法检测细胞活力；DNPH 法检测细胞 内Schiffbase浓度； DCFH—DA 荧光探针法检测 ROS水平 ；以及脂质过氧化产物 MDA含量的检测。结果表 明，MGO导致细胞 内Schiffbase、ROS和 MDA显著增加，诱导细胞发生氧化应激，白藜芦醇处理可有效改善 MGO对细胞 的 损伤作用 。 关键词 ：甲基 乙二醛；白藜芦醇；BRL一3A；氧化应激 中图分类号 ：$852．33；$853．74 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2017)04—0083—04 在临床肝病学 的发展中，非酒精性脂肪肝 (non— 一 种天然多酚类化合物 ，具有很强的抗氧化功能，可 alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)受到越来越多 作为一种细胞的抗氧化保护剂[1。因此 ，本研究 以 的关注 。调查发现，NAFLD具有相 当高的发病率。 大鼠肝细胞 BRL一3A为研究对象，初步探究 MGO 美国成年人的发病率可达到 25 左右 ，日本人和意 对 BRL一3A 的损伤以及 白藜芦醇对 BRL一3A的保护 大利人也有相似的发病率_】]。NAFLD 的主要特征 机制 。 是肝脏脂质尤其是甘油三酯的积累，而脂质积累与 1 材料与方法 脂质过氧化和氧化应激密切相关 ]。文献报道 ，氧 1．1 材料 化应激是 NAFLD发生的一个关键因素_l3]。另外 ， 1．1．1 主要试剂 白藜芦醇 、MGO、氨基胍 (amin— NAFLD病人还表现为体内炎症因子分泌增加和血 oguanidine，AG)、DCFH—DA 探针 、四甲基偶氮 唑 糖升高等 ]。甲基乙二醛 (methylglyoxal，MGO)作 盐 (MTT)、2，4一二硝基苯肼 (DNPH)，Sigma公司产 为一种常见的活性羰基化合物，普遍存在于机体的 品；DMEM培养基，Gibco公司产 品；胎牛血清 ，Hy— 组织和细胞 中。内源性的MGO可通过机体 内碳水 clon公司产品；硫代 巴比妥酸 (TBA)等其他试剂 ，均 化合物的氧化、细胞膜脂质过氧化和氨基酸的氧化 购 自国药集团化学试剂有限公司。 等多种途径生成_l4]。细胞 内大多数 的MGO主要 1．1．2 主要仪器 930A荧光光度计 ，雷磁 PHS一 来源于葡萄糖代谢和果糖代谢反应[7]，脂质代谢来 3E型 pH计 ，GNP一9080型隔水式恒温培养箱，倒置 源的MG0是由甘油 、乙酸乙酯和丙酮经酶或非酶 相差显微镜 ，全波长酶标仪。 反应转化而来_5]。外源性的 MGO主要来 自咖啡 、 1．2 方法 烘焙以及油炸食物等 ，它们很容易从外环境 中穿过 1．2．1 细胞培养 大鼠肝细胞系 BRL一3A，购 自中 细胞膜而存在于细胞质内L9。 。MGO 因具有高活 科院上海细胞库 。BRL一3A细胞用含 100mL／L胎 性羰基而易对蛋 白质 的氨基酸残基进 行修饰 ，形成 牛血清、100U／mL青霉素和 100mg／mL链霉素的 晚期糖基化终末产物 (advancedglyxationendprod- DMEM 培养基培养于体积分数为 5 的 CO 的 ucts，AGEs)。随着机体内AGEs的积累，氧化应激 37℃恒温培养箱中。 的标志物晚期糖基化终末产物受体 (receptorfor 1．2．2 细胞活力检测 细胞 活力用 MTT法检测 。 adv