罂粟cor和bbe基因rnai载体构建及烟草转化-药学学报.pdfVIP

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2017-11-11 发布于天津
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罂粟cor和bbe基因rnai载体构建及烟草转化-药学学报

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 13, 48 (7): 1169 1177 ·1169 · 罂粟 COR 和BBE 基因RNAi 载体构建及烟草转化 1, 2 1, 2* 3 1, 2 4 1, 2 陆艳梅 , 张金文 , 魏玉洁 , 魏贵民 , 张艳红 , 高宜峰 (1. 甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室, 甘肃兰州 730070; 2. 甘肃农业大学农学院, 甘肃兰州 730070; 3. 甘肃省农垦农业研究院, 甘肃兰州 730070; 4. 甘肃省中医学院, 甘肃兰州 730070) 摘要: 本研究通过RNAi 技术, 使用发卡 RNA 结构沉默罂粟可待因酮还原酶 (COR) 与小檗碱桥酶 (BBE) 基因的表达。采用RT-PCR 技术克隆得到COR 和BBE 基因全序列, 同源性比较结果显示, 它们与GenBank 中已报道的COR 和BBE 基因高度同源; 按照RNAi 设计原则, 筛选出 COR 和BBE 基因靶标序列, 并采用重叠PCR 法将其拼接成643 bp 的融合基因, 以中间载体pHANNIBAL 和植物表达载体pCEPSPS 为基础, 构建ihpRNA 植物表达载体, 用农杆菌介导法将目的基因转入烟草中, 共获得转基因植株78 株, 通过PCR 检测从中筛选出 17 株阳性植株, 可初步确定目的基因已经整合到烟草基因组中。关键词: 罂粟; COR 和BBE 基因; RNAi; 转化中图分类号: S336 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 13) 07- 1169-09 Construction and tobacco transformation of COR and BBE genes hairpin RNA vector of Papaver somniferum 1, 2 1, 2* 3 1, 2 4 1, 2 LU Yan-mei , ZHANG Jin-wen , WEI Yu-jie , WEI Gui-min , ZHANG Yan-hong , GAO Yi-feng (1. Gansu Key Lab of Crop Imp rovement Germplasm Enhancement, Lanzhou 730070, China; 2. College of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China; 3. Agr icultural Research A cademy of Gansu Reclamation, Lanzhou 730070, China; 4. Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730070, China ) Abstract : The