不同代次诱导多能干细胞增殖及牙周定向分化的能力.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) · 16 · JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．49 No．1 Feb．2017 · 论 著 · 不同代次诱导多能干细胞增殖及牙周定向分化的 能力 李静文，殷晓晖，栾庆先 (北京大学口腔医学院 ·口腔医院，牙周科 口腔数字化医疗技术和材料国家工程实验室 口腔数字医学北京市 重点实验室，北京 100081) [摘 要]目的：研究不同代次诱导多能干细胞(inducedpluripotentstemcells，iPSCs)在增殖及向牙周定向分化能 力上的区别，为今后深入研究和可能的临床应用提供理论基础。方法：复苏不同代次(P5、PIO、P15、P20)人牙龈成 纤维细胞来源的iPSCs，观察细胞形态并比较其增殖能力，进一步将各代次细胞形成拟胚体，于含生长分化因子_5 (growth／differentiationfactor-5，GDF一5)的培养基中诱导分化 14d，同时分别设置未诱导 自发分化组为阴性对照，茜 素红染色观察矿化结节并半定量分析钙盐沉积量 ，qRT—PCR及免疫荧光染色分别检测牙周相关基因及蛋白的表 达，评价各代次间分化能力的差异。结果：不同代次的iPSCs均具有很强的体外增殖能力，经牙周定向诱导的细胞 呈成纤维细胞样生长，茜素红染色可形成 “矿化”结节 ，细胞钙盐沉积量较 自发分化组显著增高且差异有统计学意 义(P5：t=2．125，P：0．003；P10：t=2．246，P=0．021；P15：t=3．754，P=0．004；P20：t=3．933，P=0．002)，但相同诱 导条件下不同代次间钙盐沉积量差异无统计学意义(牙周定向诱导组 ：F=2．365，P =0．109；自发分化对照组 ： F=2．901，P=0．067)，此外，相同代次细胞 中诱导组牙周相关标记物的表达均高于对照组且差异有统计学意义 (P0．05)，但不同代次间的蛋白表达差异无统计学意义 (骨涎蛋白：F=0．9267，P=0．450；波形蛋白：F=0．9171， P=0．455；牙骨质蛋白1：F=2．129，P=0．137)。结论：不同代次不会影响iPSCs的增殖及分化能力 ，体外长期培养 的iPSCs易于扩增，较高代次者经诱导仍可高效定向分化，适合作为牙周组织工程的种子细胞。 [关键词]多能干细胞 ；细胞代次；牙周定向分化；细胞增殖 [中图分类号]R781．3 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2017)01-0016—09 doi：10．3969／i．issn．1671—167X．2017．01．003 Comparativestudy ofproliferativeand periodontaldifferentiationpropensityofin- ducedpluripotentstem cellsatdifferentpassages LIJing—wen，YINXiao—hui，LUANQing—xian (DepartmentofPeriodontology．PekingUniversitySchoolandHospitalofStomatology NationalEngineeringLaboratoryfor DigitalandMaterialTechnologyofStomatology＆BeijingKeyLaboratoryofDigitalStomatoloyg，Beijing100081 China) ABSTRACT 0bjective：T0comparetheproliferativeandperiodontalspecificdifferentiationabilitiesof inducedpluripotentstem cells(iPSCs)atdifferentpassages．andtoinvestigatewhetherlongterm cultu— ringwouldhaveanegativeinfluenceo13theirproliferationandspecificdifferentiationcapacity．thusprovi— d