万古霉素糖基转移酶gtfe的异源表达与体外活性检测-中国药科大学.pdfVIP

学 报 ２７２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１３，４４（３）：２７２－２７６ 万古霉素糖基转移酶ＧｔｆＥ的异源表达与体外活性检测 １ １ １ １ １ ２ 王元希 ，陈俊升 ，邵　雷 ，李继安 ，林惠敏 ，陈代杰 １ ２ （上海医药工业研究院创新药物与制药工艺国家重点实验室，上海２０００４０；中国医药工业研究总院，上海２０００４０） 摘　要　为了得到具有糖基转移酶活性的重组蛋白，从万古霉素产生菌总ＤＮＡ中克隆万古霉素糖基转移酶基因ｇｔｆＥ， 连入ｐＥＴ３７ｂ构建表达质粒并转入大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达，体外测定纯化后的重组蛋白糖基转移酶活性，用ＨＰＬＣ和 ＥＳＩＭＳ检测反应产物。结果表明，重组蛋白具有预期活性，可以催化尿苷二磷酸葡萄糖与万古霉素苷元的糖基化反应。本 研究为获得糖基多样性的万古霉素奠定理论基础。 关键词　万古霉素；生物合成；糖基转移酶；异源表达；体外转糖反应 中图分类号　Ｑ７８６　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１３）０３－０２７２－０５ Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｖｉｔｒｏａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓ ｆｅｒａｓｅＧｔｆＥ １ １ １ １ １ ２ ＷＡＮＧＹｕａｎｘｉ牞ＣＨＥＮＪｕｎｓｈｅｎｇ牞ＳＨＡＯＬｅｉ牞ＬＩＪｉ′ａｎ牞ＬＩＮＨｕｉｍｉｎ牞ＣＨＥＮＤａｉｊｉｅ １ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｗＤｒｕｇ＆ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｏｃｅｓｓ牞ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ牞Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００４０牷 ２ＣｈｉｎａＳｔａｔｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ牞Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００４０牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｏｆｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ牞ＧｔｆＥ牞ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｇｅｎｅｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｈｅｔｅ ｒｏｌｏｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＧｅｎｅｇｔｆＥｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎａｎｄｌｉｇａｔｅｄ ｉｎｔｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ３７ｂ牞ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄＧｔｆＥ／ｐＥＴ３７ｂｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｃｏｌｉＢＬ２１ 牗ＤＥ３牘ＴｈｅｐｒｏｄｕｃｔｏｆｉｎｖｉｔｒｏｇｌｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎｃａｔａｌｙｚｅｄｂｙｐｕｒｉｆｉｅｄＧｔｆＥｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙ ＨＰＬＣａｎｄＥＳＩＭＳ牞ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙＴｈｅａｓｓａｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎＧｔｆＥｈａｄｅｘｐｅｃｔｅｄｇｌｕｃｏｓｙｌａ ｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｔｏｔｒａｎｓｆｅｒｕｒｉｄｉｎｅ５′ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｇｌｕｃｏｓｅｔｏｔｈｅｖａｎｃｏｍｙｃｉｎａｇｌｙｃｏｎｅＴｈｉｓｓｔｕｄｙｌａｉｄｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｇｌｙｃｏｓｙｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ牷ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ牷ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ牷ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ牷ｉｎｖｉｔｒｏｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎ ＴｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ牗Ｎｏ８１１７２９６２牘牞ａｎｄＣｈｉｎａＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙ ＨｉｇｈＴｅｃｈＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＰｒｏｊｅｃｔｆｏｒｔｈｅＲ＆ＤｏｆＮｏｖｅｌＤｒｕｇｓ牗Ｎｏ２０１２Ｚ００８牘 　　万古霉素作为临床上使用的第１个糖肽类抗